A la recherche de la DNase

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Transcription de la présentation:

A la recherche de la DNase

Sommaire Présentation Composition Principe Lecture

Présentation La gélose à l’acide désoxyribonucléique (ADN) permet la recherche de la désoxyribonucléase (DNase) des bactéries, et particulièrement des Staphylococcus aureus.

Composition Hydrolysat trypsique de caséine………………………………………………………………….20,0g Acide désoxyribonucléique (ADN)…………………………………………………………………...2,0g Chlorure de sodium……………………………………………………………………………………………...5,0g Agar……………………………………………………………………………………………………………………….12,0g pH= 7,3 source de carbone, d’azote, d’énergie, de facteurs de croissance Substrat de la DNase Assure l’équilibre osmotique Gélifiant

Mise en évidence d’une DNase
Principe Mise en évidence d’une DNase ADN    + H2O            Nucléotides ou Polynucléotides Mettre les bactéries dans un milieu contenant de l’ADN Incuber 24 heures à 37°C Rechercher si l’ADN est toujours présent ou absent en utilisant des révélateurs de l’ADN : bleu de toluidine (bleu en présence d’ADN ou rose en absence d’ADN) ou HCl (opacifiant la gélose en présence, halo clair en absence d’ADN) . DNase

Technique Ensemencer les colonies suspectes en strie unique à la surface du milieu. Incuber 24 heures à 37°C. Pendant l’incubation si la bactérie étudiée possède une DNase alors grâce à celle-ci il y aura hydrolyse:  ADN    + H2O            Nucléotides ou Polynucléotides Verser à la surface de la gélose une solution d'acide chlorhydrique (HCl) soit du bleu de toluidine pour avoir la lecture de la gélose.

Lecture Avec HCl Avec le Bleu de Toluidine
Formation d’un halo transparent autour de la strie: DNase + Pas de formation d’un halo transparent autour de la strie: DNase - Formation d’un précipité bleu: absence de DNase: DNase - Formation d’une coloration rose ou transparente: présence d’une DNase DNase +