Apport du papier buvard dans l’étude de la résistance du VIH-1 aux antirétroviraux en milieu décentralisé au Sénégal Khady Kébé Laboratoire de Bactériologie.

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1 Apport du papier buvard dans l’étude de la résistance du VIH-1 aux antirétroviraux en milieu décentralisé au Sénégal Khady Kébé Laboratoire de Bactériologie Virologie CHU Aristide le Dantec / Dakar

2 Problématique Contexte d’accès universel au TARV Augmentation du nombre de patients sous TARV en Afrique Subsaharienne Nécessité du monitoring du TARV - Suivi virologique (CV & génotypage) timide voire inexistant dans certains pays -Échec thérapeutique passe inaperçu

3 Problématique Limites Suivi virologique (CV & génotypage) – Manque d’infrastructures – Conditionnement échantillons de sang/plasma en milieu décentralisé – Nécessité du maintien de la chaîne de froid pour stockage, conservation et expédition des échantillons Solution: Dried Blood Spot (DBS)

4 Objectifs Montrer l’importance du papier buvard dans le génotypage chez les patients vivant en zone décentralisée Déterminer fréquences et types de mutations sélectionnées: - chez patients avec CV ≥ 3log copies/ml après au moins 6 mois de TARV - chez patients naïfs de TARV Déterminer la diversité génétique du VIH-1 dans la population d’étude

5 Méthodologie 133 cartes de DBS de patients suivis en milieu décentralisé – Patients sous TARV au moins 6 mois avec CV>1000 copies/ml (NucliSens) – Patients naïfs de TARV Extraction de l’ARN viral Technologie de Boom (NucliSens miniMag®)

6 Méthodologie Génotypage – Amplification Protéase et Transcriptase inverse Protocole ANRS – Séquençage du produit de PCR purifié – Recherche de mutations de résistance Base de données de l’université de Stanford HIVDB – Analyse phylogénétique Clustal X 1.83, Site Web Rega et Simplot 2.6

7 Guédiawaye 15 km Thiès, Diourbel et Touba 70 à 140 km Kolda et Sédhiou 600 et 700 km Saint-Louis et Ndioum 260 et 600 km Résultats

8 Caractéristiques de la population d’étude  Sex ratio F/H = 2,27  Age [1 – 65 ans], Médiane 29 ans,  82% adultes Traitement ARV - 46 naïfs - 81 sous traitement de 1 ère ligne Schéma thérapeutiques les plus fréquents AZT- 3TC- NVP (41) AZT- 3TC- EFV (17) - 6 sous traitement de deuxième ligne 2 INTI + LPV/rtv

9 Résultats Charge virale Charge virale médiane 4,5 log Copies/ml [3log- 5,44log copies/ml] Taux d’amplification 119/133 amplifiés soit 89,4%

10 Résultats Résistance chez patients naïfs de TARV (n=36) 3 patients avec mutations de résistance (8%) K103N – M184V Résistance chez patients sous TARV (n=83) – Médiane de suivi 17 mois [6-60 mois] – Résistance à au moins une molécule d’ARV chez 73,4% des patients Résistance INTI et INNTI 53 patients Résistance INNTI 8 patients Résistance IP 2 patients

11 Résultats Fréquences des mutations de résistance TAMs Mutations associées aux INNTI Mutations associées aux INTI 49% 23% 32% 39% 31% 34%

12 Résultats Diversité génétique Prédominance du CRF_02AG - Touré Kane 2001 - Diop Ndiaye 2010 74% 8% 7%

13 Résultats U/CRF02_AG CRF02_AG/C A3/C D/C Exemples de profils de recombinaisons

14 Discussion Importance du papier buvard dans le génotypage du VIH en conditions de terrain Taux d’amplification - 119/133 amplifiés soit 89,4% - Etude Cameroun (McNulty et al., 2006) 92,5% - Etude Mexico (Bertagnolio et al., 2007) 90,1%

15 Discussion Resistance patients naïfs Notre étude : 8% de résistance Etudes antérieures résistance < 5% – Dakar 2007 (Ahidjio 2009) – Dakar 2003-2005 -2007 Diop-Ndiaye H, ( 2010 ) Nécessité d’une surveillance

16 Discussion Résistance patients sous TARV Notre étude : 73,4% de résistance Les mutations les plus fréquentes – Notre étude: M184V et K103N – Etude Angola (Garrido et al., 2008) M184V 70% K103N 39%

17 Conclusion Taux de résistance élevé Nécessité d’un suivi virologique rapproché Papier buvard, outil important dans le génotypage du VIH en milieu décentralisé Apport dans le suivi des patients et les stratégies OMS (monitoring et surveillance)

18 Remerciements Patients ayant participé à cette étude Laboratoire de Bactériologie et de Virologie, Hôpital Aristide le Dantec, Dakar, Sénégal Diouara A A M Diop-Ndiaye H Diallo S, Tchiakpè E Ndiaye O, Thiam M Touré-Kane Mboup S Sites décentralisés Sénégal (Centre de santé Roi Baudouin de Guédiawaye, Hôpital de NDioum, Hôpital Régional de Saint-Louis Diouf-Sakho M Ouatarra B Diallo A Faye M Sakiné M

19 Merci de votre attention