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Microbiologie de Mycobacterium ulcerans Cours International Centre Pasteur du Cameroun 23-30 janvier 2006 F. Portaels.

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1 Microbiologie de Mycobacterium ulcerans Cours International Centre Pasteur du Cameroun janvier 2006 F. Portaels

2 Description de M. ulcerans 1.Généralités Mycobactérie à croissance lente Primoculture positive en 6 à 8 semaines Subculture positive en 2 semaines Croissance optimale entre 30 et 32°C (quelques souches peuvent pousser à 37°C) Mycobactérie non chromogène ou jaunâtre (souches africaines) Mycobactérie sensible à la majorité des antibiotiques antimycobactériens (sauf INH, PAS, éthambutol, éthionamide, thioacétazone, thiosemicarbazone, thiocarbanilide)

3 2a. Caractéristiques phénotypiques de M. ulcerans et despèces apparentées ParamètresM. ulceransM. marinum M.shinshuense Pigmentation dans lobscurité+-+ Pigmentation à la lumière+++ Croissance à 37°C--- Croissance sur eau peptonée-+- Croissance en présence de: Isoniazide (10 µg/ml)MM- Hydrazide de lacide thiophène carboxylique (2 µg/ml) Hydroxylamine (250 µg/ml)F++ Paranitrobenzoate (500 µg/ml)-M- NaCl à 5%--- +:>85% de souches positives; -:<15% de souches positives; M:de 50 à 85% de souches positives; F: de 15 à 49% de souches positives

4 2b. Caractéristiques phénotypiques de M. ulcerans et despèces apparentées (suite) ParamètresM. ulceransM. marinum M.shinshuense Propriétés enzymatiques Catalase, >45 mm de mousse--+ Hydrolyse du Tween 80 (10 jours)-+- UréaseF+- Production de niacineF/--- Réduction des nitrates--- Phosphatase acideF+- +:>85% de souches positives; -:<15% de souches positives; M:de 50 à 85% de souches positives; F: de 15 à 49% de souches positives

5 3a. Caractéristiques des différents sous-groupes géographiques de M. ulcerans Sous-groupes géographiques de M. ulcerans AFRAUSMEXAMSCHIJAP Pigmentation dans lobscurité +(1)--+-+ Pigmentation à la lumière +(1)--+-+ Croissance à 37°C Croissance sur eau peptonée Croissance en présence de: Isoniazide (10 µg/ml)+M+--- Hydrazide de thiophene-2- carboxylic (2 µg/ml) Hydroxylamine (250 µg/ml)-++M++ Paranitrobenzoate (500 µg/ml)--+-V- NaCl à 5% (1)Léger pigment jaunâtre (2)Résultats de Portaels et al., 1996 (JCM 1996; 34: )

6 3b. Caractéristiques des différents sous-groupes géographiques de M. ulcerans (suite) Sous-groupes géographiques de M. ulcerans AFRAUSMEXAMSCHIJAP Propriétés enzymatiques Catalase, >45 mm de mousse Hydrolyse du Tween 80 (10 jours) Uréase Production de niacine Réduction des nitrates Phosphatase acideM----- Résultat du séquençage (2)Type 1Type2Type 3marshinshin (1)Léger pigment jaunâtre (2)Résultats de Portaels et al., 1996 (JCM 1996; 34: )

7 4a. Sensibilité in vitro de M. ulcerans aux antimycobactériens AntimycobactérienMilieuµg/ml (1) Croissance IsoniazideL-J0,110+ Acide para-aminosalicycliqueL-J0,550+ EthambutolL-J0,255+ StreptomycineL-J250- Rifampicine7H112- L-J440- EthionamideL-J430+ CyclosérineL-J530- KanamycineL-J820- Clarithromycine7H110,54- Ofloxacine7H112- Ciprofloxacine7H111- (1)Concentrations testées par plusieurs auteurs

8 4b. Sensibilité in vitro de M. ulcerans aux antimycobactériens (suite) AntimycobactérienMilieuµg/ml (1) Croissance Sparfloxacine7H110,5 Amikacine7H112- L-J30- CapréomycineL-J1620- ThioacétazoneL-J2+ ThiosemicarbazoneL-J0,54+ ViomycinL-J1050- ThiocarbanilideL-J50+ DapsoneL-J3- L-J1F L-J0,3M (1)Concentrations testées par plusieurs auteurs

9 5. Identification de M. ulcerans par PCR Séquençage de lARN 16S. Pas de différence entre M. ulcerans et M. marinum PCR IS2404 Sensibilité: excellente Spécificité ? Dautres espèces de mycobactéries sont aussi IS2404 positives ex: M. liflandii, M. pseudoshottssii Quelques souches de M. marinum (Chemlal et al., JCM 2002; 40: ).

10 6a. Quelques caractéristiques phénotypiques de M. ulcerans et dautres espèces IS2404 positives et espèces apparentées Paramètres ulcmarlifpseudoshotshott Pigmentation dans lobscurité+---- Pigmentation à la lumière+--- Croissance à 30°C+++-F Croissance à 37°CFF--- Croissance à 37°C----- Croissance sur eau peptonée-+- Croissance sur charcoal-+-+ Croissance en présence de: Isoniazide (10 µg/ml)MM+- Hydrazide de lacide thiophène carboxylique (2 µg/ml) Hydroxylamine (250 µg/ml)FF++++ Paranitrobenzoate (500 µg/ml)-M-- NaCl à 5%----

11 6b. Quelques caractéristiques phénotypiques de M. ulcerans et dautres espèces IS2404 positives et espèces apparentées (suite) Paramètres ulcmarlifpseudoshotshott Propriétés enzymatiques Catalase, >45 mm de mousse----- Hydrolyse du Tween (10 jours) UréaseF+-++ Production de niacineF/--+/-++ Réduction des nitrates----- Phosphatase acideF+-MM IS2404+F++- +:>85% de souches positives; -:<15% de souches positives; M:de 50 à 85% de souches positives; F: de 15 à 49% de souches positives

12 7. Impact des mycobactéries IS2404 positives sur le diagnostic clinique de lUB par PCR > 500 échantillons clinique inoculés sur charcoal agar (Realini et al. 1999): Aucun positif ! 20 échantillons ZN (3+, 4+) mais culture sur LJ négative analyse moléculaire tous positifs pour M. ulcerans (variété africaine). Il est peu probable que ces autres mycobactéries IS2404 positives soient responsables dUB. Donc, pas dimpact sur le diagnostic clinique de lUB par PCR

13 8. Les outils moléculaires: conclusions PCR IS2404: meilleur test pour confirmer un cas cliniquement suspect dUB Empreintes génétiques: -excellentes pour distinguer M. ulcerans des autres mycobactéries IS peuvent être appliquées à des échantillons cliniques * MIRU-VNTR (Stragier et al., 2005; Ablordey et al., 2005) * IS2404/GC rich PCR (Ablordey et al., 2005)


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