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Techniques immunologiques par Mme Boumendjel Messarah A. Année 2008/2009 Université Badji Mokhtar (Annaba) Cours de techniques immunologiques.

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2 Techniques immunologiques par Mme Boumendjel Messarah A. Année 2008/2009 Université Badji Mokhtar (Annaba) Cours de techniques immunologiques

3 ELISA

4 Enzyme ELISA

5 Linked Enzyme ELISA

6 ImmunoSorbent EnzymeLinked ELISA

7 Assay EnzymeLinkedImmunoSorbent ELISA

8 Anticorps Antigène ELISA EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay E E Ce test repose donc sur lutilisation dune enzyme pour déceler les complexes immuns

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10 Les différents types dELISA (variantes) - Phase homogène - Phase hétérogène - ELISA direct - ELISA indirect - ELISA Sandwich - ELISA par compétition

11 Les ELISA en phase homogène E E Antigène présent dans léchantillon Antigène absent de léchantillon S P S P

12 Les ELISA en phase hétérogène ELISA direct Anticorps marquéAntigène marqué ELISA indirect Recherche danticorps dans le plasma E S P E S P E S P

13 Les ELISA en phase hétérogène ELISA sandwich Sandwich (direct) Double Sandwich (indirect) E S P E S P

14 Les ELISA en phase hétérogène ELISA par compétition Compétition au niveau de lanticorps Anticorps à doser Compétition au niveau de lantigène Antigène à doser E E S P S P E E S P S P

15 Applications : Les techniques ELISA sont très utilisées en : recherche fondamentale et appliquée (reconnaissance des épitopes protéiques, des haptènes) analyse médicale, pour le dosage de nombreuses substances (Ag, Ac, hormones, marqueurs tumoraux, médicaments…)

16 Exemple en détails: Nous allons détecter la présence danticorps anti- BSA (Bovine sérum albumine) dans le sérum dun lapin.

17 La première étape : le « cotting » consiste à tapisser le fond des puits avec la BSA (par effet électrostatique)

18 La seconde étape consiste à mettre le sérum à tester (du lapin) dans les puits préalablement saturé

19 Si le lapin est « immunisé », son sérum possède des anticorps anti-BSA

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21 Ces anticorps anti-BSA viennent se fixer sur la BSA qui tapisse le fond du puits.

22 On vide ensuite le puits dun geste rapide.

23 Puis le puits est lavé avec une solution tampon tween pour enlever les quelques anticorps non fixés.

24 On met alors les seconds anticorps de détection qui se fixent aux anticorps anti-BSA.

25 Ces anticorps de détection se fixent aux anticorps anti- BSA.

26 Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon tween

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28 Le substrat se colore en bleu en présence de lenzyme

29 La coloration bleue indique donc la présence danticorps anti BSA. Lintensité de la coloration est proportionnelle à la concentration danticorps anti-BSA ; cette méthode permet donc un dosage par colorimétrie


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