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Regulation of Interferon Regulatory Factor-3 by the Hepatitis C Virus Serine Protease Eileeen Foy, Kui Li, Chunfu Wang, Rhea Sumpter Jr., Masanori Ikeda,

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Présentation au sujet: "Regulation of Interferon Regulatory Factor-3 by the Hepatitis C Virus Serine Protease Eileeen Foy, Kui Li, Chunfu Wang, Rhea Sumpter Jr., Masanori Ikeda,"— Transcription de la présentation:

1 Regulation of Interferon Regulatory Factor-3 by the Hepatitis C Virus Serine Protease Eileeen Foy, Kui Li, Chunfu Wang, Rhea Sumpter Jr., Masanori Ikeda, Stanley M. Lemon, Michael Gale Jr. SCIENCE, mai 2003

2 HCV: épidémiologie 170 millions de personnes infectées dans le monde problème de Santé Publique Traitement par Ribavirine+PEG Interféron nombreuses résistances Nombreuses mutations adaptatives quasi-espèces Perturbation du système immunitaire de lhôte

3 HCV: génome Précurseur polyprotéique clivé en protéines structurales et non-structurales NS3/4A complexe ATPase RNA helicase Serine protéase Formation protéines NS à partir du précurseur Possible cible thérapeutique

4 Contrôle cellulaire de linfection à HCV Affecte toutes les étapes du cycle viral Rôle des Interferon Regulatory Factors (IRFs) IRF-3 IRF-3-P HCV réplication VAK + + Promoteurs transcription Le virus stimule les réponses antivirales voie de lIRF-3 importante dans la persistance virale IFNβ, ISG56, ISG15, RANTES +

5 Objectif de létude Étudier la voie de lIRF-3 dans des lignées cellulaires infectées par le HCV Stratégie Virus : HCV 1b (ARN) Cellules : HuH7-2-3 (hépatocarcinome) exprimant ARN complet de HCV1b UHCV11 (ostéosarcome) exprimant le précurseur polyprotéique de HCV1a Activateur de lIRF-3 : virus Sendaï (SenV)

6 Effet de SenV et de HCV sur IRF-3 (1) SenV induit la translocation nucléaire de IRF-3 Ni la réplication de HCV1b, ni SenV ninduisent cette translocation dans les cellules HuH7-2-3 Arrêt de la réplication de HCV1b (+IFN) restaure laction de SenV Translocation nucléaire de IRF-3 bloquée par expression polyprotéine HCV1a Linhibition de lactivation de IRF-3 est spécifique de HCV (quel que soit le sous-type viral et la lignée cellulaire, indépendamment de la réplication)

7 Effet de SenV et de HCV sur IRF-3 (2) SenV induit la translocation nucléaire de IRF-3 dans HuH7 activation des promoteurs transcription Action inhibée par la réplication de HCV1b dans Hu7-2-3 restauration par traitement à lIFN Le blocage par HCV de la voie de lIRF-3 empêche lexpression des gènes activés par IRF-3

8 Quelle protéine de HCV est impliquée dans le blocage de la voie de lIRF-3 ? Induction promoteur ISG56 fortement par NS3/4A NS3/4A perturberait IRF-3 ? NS3 et NS4A testées séparément seul le complexe est actif

9 Quel est le mode daction de NS3/4A ? blocage de laccumulation de IFR-3-P blocage de la translocation nucléaire de IRF-3 P inactive

10 Quelle est la fonction de NS3/4A mise en jeu ? Mutagenèse dirigée W1528A supprime lactivité hélicase C1125A supprime lactivité sérine protéase souche C1125A ne peut bloquer linduction de lIFR-3 par SEnV implication de lactivité sérine protéase ? implication de lactivité sérine protéase ? Inhibition spécifique de lactivité NS3/4A sérine protéase: SCH6 bloque le clivage du précurseur protéique restaure phosphorylation et translocation nucléaire de IRF-3 par SenV Activité serine protéase de NS3/4A indispensable au blocage (réversible) de la voie de lIRF-3

11 Relation entre réplication de HCV et IFR-3 ARN génomique de la souche HCVwt Con1 accumulation de mutations dans NS réplicon HP réplicon HP = forte réplication Blocage de la phosphorylation de IRF-3 basale et induite de la translocation (spécifique de IRF-3) de lactivation des promoteurs IRF-3 dépendants réplicon A7 réplicon A7 = faible réplication (10x plus faible) Diminution mais maintien de la phosphorylation de IRF-3 de la translocation de lactivation des promoteurs HCV peut à la fois activer et bloquer la voie de lIRF-3

12 Discussion HCV capable de contourner le système immunitaire de lhôte HCV capable de contourner le système immunitaire de lhôte IRF-3 activé inhibe la réplication virale IRF-3 activé inhibe la réplication virale Blocage de IFR-3 augmente la réplication virale Blocage de IFR-3 augmente la réplication virale importance de lactivation de IFR-3 importance de lactivation de IFR-3 Identification de VAK ? Identification de VAK ? IRF-3 induit lexpression des plusieurs gènes cellulaires dont IFN type I IRF-3 induit lexpression des plusieurs gènes cellulaires dont IFN type I induction de centaines de gènes (ISG) induction de centaines de gènes (ISG) linhibition de lactivation de lIRF-3 permet la persistance virale, mais diminue aussi lefficacité des traitements (IFN) linhibition de lactivation de lIRF-3 permet la persistance virale, mais diminue aussi lefficacité des traitements (IFN) Protéase virale = cible thérapeutique à envisager Protéase virale = cible thérapeutique à envisager Blocage de le réplication HCV par inhibition du clivage du précurseur Restauration de la voie de lIRF-3 amélioration de la réponse antivirale


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