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Collège Lionel-Groulx Analyse génétique Bio 701. Collège Lionel-Groulx Plan de la présentation Quest-ce que lanalyse génétique et à quoi ça sert? Étapes.

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1 Collège Lionel-Groulx Analyse génétique Bio 701

2 Collège Lionel-Groulx Plan de la présentation Quest-ce que lanalyse génétique et à quoi ça sert? Étapes de lanalyse génétique: Extraction dADN ACP (amplification en chaîne par polymérase) Digestion de lADN Électrophorèse sur gel dagarose Analyse des résultats

3 Collège Lionel-Groulx Gène, locus et allèle… Chaque gène occupe un locus précis sur un chromosome précis Les gènes peuvent exister en plusieurs «versions» que nous appelons allèles Les organismes diploïdes «normaux» possèdent deux allèles pour chaque gène

4 Collège Lionel-Groulx Analyse génétique Lanalyse génétique que nous ferons consiste à déterminer le génotype des cobayes. Définitions: Génotype: inventaire des allèles dun individu pour un gène ou un ensemble de gènes. Cest ce qui détermine les protéines produites. Phénotype: caractère visible et/ou mesurable et/ou identifiable dun individu. Le phénotype dépend du génotype. Il est lexpression des protéines produites.

5 Collège Lionel-Groulx Analyse génétique Autres définitions: Allèle dominant vs récessif: dans une paire dallèle, il arrive que lexpression dun allèle (dominant) masque lexpression de lautre (récessif) Dominance incomplète/codominance: il arrive parfois que lexpression de deux allèles différents donne un nouveau phénotype. Homozygote vs hétérozygote: si un individu porte deux allèles différents pour un même gène on dit de lui quil est hétérozygote (par opposition à homozygote).

6 Collège Lionel-Groulx Analyse génétique Au labo, une fois les génotypes déterminés, nous les comparerons aux phénotypes des cobayes pour évaluer: Y a-t-il un allèle qui est dominant? Si oui, parmi ceux qui possèdent le phénotype dominant, qui est homozygote dominant et qui est hétérozygote?

7 Collège Lionel-Groulx Analyse génétique Lanalyse génétique peut aussi permettre: De calculer les risques de transmissions de maladies héréditaires à ses enfants Détablir la paternité dun enfant Didentifier un criminel De déterminer si un aliment est un OGM ou non De cartographier le génome dune espèce (ex.: génome humain) En modifiant notre technique un peu, nous pourrions isoler et cloner un gène (par transformation bactérienne par exemple)

8 Collège Lionel-Groulx Étapes du labo

9 Collège Lionel-Groulx Extraction dADN Rinçage de la bouche avec de la saline Centrifugation I (élimination du surnageant) Extraction de lADN par ébullition (avec Chelex pour éliminer les cations) Centrifugation II (élimination du culot)

10 Collège Lionel-Groulx Amplification de lADN (chap. 20) Nous ferons faire de la réplication accélérée à notre ADN grâce à lACP À laide dun thermocycleur, des nucléotides, des amorces et des enzymes de réplication Cycle: Dénaturation (94º) Hybridation (68 º) Élongation (72º)

11 Amplification en chaîne par polymérase (ACP) 1.Dénaturation (chauffage) 2.Renaturation (liaison des amorces) 3.Extension (ajout de nucléotides) Après 20 cycles, 1,000,000x plus de la séquence visée par rapport au reste!Après 20 cycles, 1,000,000x plus de la séquence visée par rapport au reste! Collège Lionel-Groulx

12 Animation sur lACP Voir: Polymerase Chain Reaction (683.0K) hill.com/sites/ /student_view0/cha pter16/animations.html hill.com/sites/ /student_view0/cha pter16/animations.htmlOu lyon.fr/RELIE/PCR/principe/anim/presentation.htm lyon.fr/RELIE/PCR/principe/anim/presentation.htm

13 Collège Lionel-Groulx Digestion de lADN par HaeIII Les fragments dADN du gène TAS2R38 mesureront 221 pb (paires de bases) Les allèles «goûteurs» seront coupés en deux par lendonucléase HaeIII Les allèles «non-goûteurs» ne seront pas coupés par lendonucléase HaeIII car leur séquence de nucléotides est différente

14 Collège Lionel-Groulx Enzymes de restriction Les enzymes de restrictions (dont lendonucléase HaeIII) sont des outils en génie génétique Ils permettent de couper lADN à des endroits précis (séquences précises) Il en existe plusieurs (ex.: BamH1, EcoR1, HaeIII, etc…) qui coupe chacune à une séquence précise dans lADN

15 Collège Lionel-Groulx Animation sur les enzymes de restriction (endonucléases) Voir : Restriction Endonucleases (647.0K) hill.com/sites/ /student_view0/cha pter16/animations.html hill.com/sites/ /student_view0/cha pter16/animations.html hill.com/sites/ /student_view0/cha pter16/animations.html

16 Collège Lionel-Groulx Électrophorèse Une fois les fragments dADN coupés, il faut les séparer en fonction de leur grandeur En appliquant un champ électrique à des molécules dADN, nous les forcerons à passer au travers dun filtre de gel (agarose), les plus petits morceaux traversant plus rapidement le filtre que les gros fragments

17 Collège Lionel-Groulx Électrophorèse (chap. 20)

18 Collège Lionel-Groulx Résumé de la procédure On va prélever vos cellules On en extrait lADN On amplifie (copie) un gène précis à laide de lACP On essaie de couper le gène à laide dune enzyme de restriction On sépare les fragments de différentes tailles à laide de lélectrophorèse Lanalyse croisées des fragments (génotypes) et des phénotypes des cobayes nous indiquera le « type de relation » entre les deux allèles


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