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ELISA Enzyme ELISA Linked Enzyme ELISA ImmunoSorbent EnzymeLinked ELISA.

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Présentation au sujet: "ELISA Enzyme ELISA Linked Enzyme ELISA ImmunoSorbent EnzymeLinked ELISA."— Transcription de la présentation:

1

2 ELISA

3 Enzyme ELISA

4 Linked Enzyme ELISA

5 ImmunoSorbent EnzymeLinked ELISA

6 Assay EnzymeLinkedImmunoSorbent ELISA

7 Anticorps Antigène ELISA EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay E E

8 Principe du test ELISA (1) Coating de l Ag ou de lAc Saturation Support Tampon de coating Saturation Lavages

9 Substrat incolore Produit coloré Addition du ligand marqué avec lenzyme Principe du test ELISA (2) E E E E Lavages: PBS-Tween Addition du substrat de l enzyme E E Enzymes Substrats

10 Les différents types dELISA - Phase homogène - Phase hétérogène - ELISA direct - ELISA indirect - ELISA Sandwich - ELISA par compétition

11 Les ELISA en phase homogène E E Antigène présent dans léchantillon Antigène absent de léchantillon S P S P

12 Les ELISA en phase hétérogène (1) ELISA direct Anticorps marquéAntigène marqué ELISA indirect Recherche danticorps dans le plasma E S P E S P E S P

13 Les ELISA en phase hétérogène (2) ELISA sandwich (1) Sandwich direct -Symétrique -Asymétrique Sandwich indirect E S P E S P

14 Les ELISA en phase hétérogène (3) ELISA sandwich (2) Immunocapture : détection danticorps spécifiques E S P E S P

15 Les ELISA en phase hétérogène (4) DO [antigène ou anticorps] Limite de détection Zone linéaire Phase plateau ELISA non compétitif

16 Les ELISA en phase hétérogène (5) ELISA par compétition (1) Compétition au niveau de lanticorps Anticorps à doser Compétition au niveau de lantigène Antigène à doser E Élimination par lavage E E S P S P

17 DO [antigène ou anticorps] Les ELISA en phase hétérogène (6) ELISA par compétition (2)

18 Choix du test - Quel est le but du test? - Quels réactifs sont disponibles? - Quel va être lutilisation de ce test?

19 Cupule Coatée avec anticorps spécifique Présence dantigène Absence dantigène Distribution des témoins et des échantillons S P S P Addition du mélange substrat-chromogène Distribution du conjugué HRP Principe du kit utilisé pendant la partie pratique

20 Coating de lantigène (IgG de lapin) Addition de lanticorps marqué avec la PAL Addition de lanticorps marqué à la biotine S P S P Addition du mélange Chromogène-Substrat Addition de lavidine recouverte de la PAL Addition du mélange Chromogène-Substrat Dosage dIgG de lapins par un test ELISA direct

21 Les techniques apparentées (1) ELISPOT Cellules Nitrocellulose Culture cellulaire Lavages E E Révélation Addition dun substrat précipitant Apparition de spots

22 Les techniques apparentées (2) - Western blot - immunocytochimie ou immunohistochimie Beaucoup plus loin………... - Immunofluorescence - Cytométrie en flux

23 Refracted light 1 2 Incidentlight Goldfilm Prism Ligand flow time Light refraction 1 2 Association Dissociation PrinciplesofBiacore TM analysis


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