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Diagnostic biologique de linfection à HEV XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008 Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de Toulouse & INSERM.

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1 Diagnostic biologique de linfection à HEV XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008 Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de Toulouse & INSERM U563

2 Mr D John 62 ans Australien en France depuis 4 ans Consulte son médecin généraliste pour un ictère ATCD : –diabète de type 2 sous metformine et diamicron depuis 2 ans Habitudes de vie: –consommation dalcool 30 à 40 g/j –Habite sur une péniche sur le Canal du Midi

3 Fièvre à 38°C et céphalées Ictère depuis 2 j Prise de 1 g de paracétamol la veille de lhospitalisation Biologie : –ASAT : 4500 UI/l –ALAT : 5000 UI/l –Phos Alc : N – GT : 133 UI/l –TP : 26% CAT pratique ?

4 Afrique-Asie-Amérique centrale endémie élevée épidémies avec transmission hydrique cas sporadiques Pays industrialisés cas sporadiques : autochtones >> importés régions endémiques Boutrouille JCM 07 ; Mansuy JMV 08 Circonstances épidémiologiques

5 Exposition directe à un réservoir animal liée à une activité professionnelle ou de loisir Habitudes alimentaires Exposition environnementale Facteurs de risque

6 Hépatite symptomatique : ictère, fièvre, asthénie, nausées, vomissements,… Formes particulières : manifestations articulaires, thrombopénie Formes asymptomatiques : élévation des ALAT Circonstances cliniques

7 Femme enceinte Hépatopathie chronique sous-jacente Immunodépression thérapeutique : chimiothérapie anticancéreuse ou transplantation Facteurs de gravité

8 Outils virologiques Diagnostic direct Dépistage génomique Sang Selles Diagnostic indirect Dépistage sérologique IgG IgM

9 Cinétique des marqueurs après infection symptômes jours3 4 mois Transaminases IgM IgG virémie virus dans les selles contage

10 Niveau dendémie national ou régional recherche ou non des marqueurs HEV en 1 ère ligne Tests disponibles au laboratoire NABM : Anticorps anti-HEV : B70 ARN HEV : BHN 250 Dalton Lancet 07 ; De Silva JMV 08 Stratégie diagnostique

11 Tests sérologiques & antigènes utilisés Génotype 1, 2 1 Ag recombinant Peptide synthétique Ag recombinant Genelabs Adaltis MP Diagnostics II III ORF 2.1

12 Trousses EIAgen IgM HEV Adaltis IgM HEV ELISA MP Diagnostics Assure HEV IgM Rapid test MP Diagnostics Panels Panel A : 50 sérums ARN HEV (+), G3 Panel B : 406 sérums IgG ARN HEV (-) anti-HEV (-) Evaluation des tests IgM anti-HEV

13 Microplaque Adaltis Microplaque MP Diagnostics Echantillons ARN HEV (+) Total (n=50) Negatif (n=9) Positif (n=41) négatifpositifnégatifpositifnégatifpositif Test rapide MP Diagnostics IgM anti-HEV anti-HEV IgG

14 Performance Test rapide MP Diagnostics Microplaque MP Diagnostics Microplaque Adaltis Spécificité % Sensibilité % VPN % VPP %

15 Quantification des IgG dilutions de raison 2 / UA ou UI Avidité des IgG urée 5M IgA Western-blot Tests sérologiques spécialisés Rendall JMV 08 ; Zhang JMV 02 ; Takahashi JCM 05

16 Détection ARN HEV : RT-PCR conventionnelle RT-PCR temps réel tests non commercialisés / protocoles validés / EEQ essentiel amorces / sonde ORF2 limite de détection 500 c/ml Mansuy JCM 04 ; Mansuy JMV 04 Quantification ARN HEV : RT-PCR temps réel Caractérisation ARN HEV par séquençage Tests moléculaires

17 Sang : prélèvement de choix Selles : gain de 15 % vs sang uniquement Salive : rarement positif Echantillons pertinents

18 to 07 Trimesters Periods Number of cases Rainfall (mm) Hépatites E aiguës en Midi-Pyrénées Mansuy JCV 08

19 Données cliniques Démographie H/F : 41/21 Age : 58 (20-82) Symptômes Jaunisse Asthénie Fièvre Arthromyalgie Douleur abdominale Céphalée Nausée Anorexie Perte de poids Diarrhée Eruption (%)

20

21 Evolution chronique dans 2 situations : Chimiothérapie anticancéreuse Peron JGH 06 ; Tamura Hepatol Res 07 Transplantation Kamar NEJM 08 ; Haagsma Liver Transpl 08 Progression vers la cirrhose possible : Gerolami NEJM 08 ; Kamar AJT 08 Hépatites E chez limmunodéprimé

22 A B C Lésions histologiques Hépatite aiguë Hépatite chronique après 15 mois dévolution Cirrhose E après 3 ans dévolution Kamar AJT 08

23 Diversité du génotype 3 Capside ORF3 ORF2 ORF1 M YPVXHR HV ORF1RdRpORF2 Région hypervariable Polymérase Capside

24 région ORF2 348nt 3f 3b 3c 3e Souches humaines locales Souches porcines

25 ORF1 Région RdRp 383 nt 0.1 AF b-Pakistan L b-China M b-Pakistan L b-China M b-China D b-China D b-China X b-China AF a-India AF a-India D a-Burma M a-Burma AF a-Nepal X a-India AF a-Pakistan AY e-Chad AY d-Morocco M Mexico AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB cJapan-swine AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB e-China AJ d-China AY d-China-swine AB b-Japan-deer AB b-Japan AB b-japan AB b-Japan AB b-Japan AB b-Japan-boar AP b-Japan AB b-Japan TLS39 AB a-Japan AB a-Japan AB a-japan AF a-USA AF a-USA-swine AB a-Japan-swine AY j-Canada-swine TLS41 TLS40 AF Kyrgyzstan-swine TLS38 AB e-Japan TLS42 AB e-Japan-swine TLS36 TLS35 TLS37 TLS31 TLS32 TLS33 TLS34 TLS28 TLS19 TLS12 TLS10 TLS11 TLS14 TLS13 TLS6 TLS8 TLS3 TLS2 TLS1 TLS5 TLS4 TLS7 TLS9 TLS18 TLS16 TLS15 TLS30 TLS29 TLS27 TLS26 TLS25 TLS24 TLS23 TLS22 TLS21 TLS Souches humaines locales Souches porcines 3f 3b 3c 3e

26 ORF1 Région HVR 345 nt 0.1 AF b-Pakistan M b-Pakistan L b-China D b-China L b-China M b-China D1109-1b-China X b-China AF a-India AF a-India X a-India AF a-Nepal M a-Burma D a-Burma AF a-Pakistan AY e-Chad AY d-Morocco M a-Mexico AB b-Japan AB c-Japan AB b-Japan AB b-Japan-swine AB b-Japan AB b-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AJ e-China AY d-China-swine AB e-China AF g-Kyrgyrstan-swine AB e-Japan-swine AB e-Japan TLS42 AB b-Japan AB b-Japan AB b-Japan AB b-Japan-boar AP b-Japan AB b-Japan AB b-Japan-swine AB a-Japan AB a-Japan AB a-Japan AF a-USA-swine AF a-USA AY j-Canada-swine TLS39 TLS41 TLS40 TLS38 TLS32 TLS33 TLS34 TLS28 TLS31 TLS36 TLS37 TLS35 TLS25 TLS26 TLS24 TLS23 TLS21 TLS22 TLS20 TLS29 TLS30 TLSE19 TLS27 TLS17 TLS18 TLS16 TLS15 TLS04 TLS05 TLS07 TLS08 TLS06 TLS13 TLS14 TLS12 TLS10 TLS11 TLS09 TLS02 TLS03 TLS Souches humaines locales Souches porcines 3f 3b 3c 3e

27 0.1 AB b-Japan-deer AB b-Japan AB b-Japan-boar AP b-Japan AB b-Japan AB b-Japan-swine AB a-Japan AB a-Japan AB a-Japan AF a-USA AF a-USA-swine AY j-Canada-swine AB Mongolia-swine AB e-Japan-swine AB e-Japan-swine AB e-Japan TLS25 AF GC-3g-kyrgyrztan-swine AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan-swine AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB c-Japan AB g-China AJ d-China AY d-China-swine M a-Mexico AY e-Chad AY d-Morocco L b-China M b-China L b-China D b-China D b-China X b-China AF a-Pakistan AF a-Nepal X a-India AF a-India AF a-India D a-Burma M a-Burma Génome complet Souches humaines locales Souches porcines 3f 3e 3b 3a Abravanel EID sous presse

28 Transmission nosocomiale ? Mansuy CID sous presse

29 HEV constitue un pathogène émergent pour les pays industrialisés justifiant une stratégie diagnostique adéquate : sérologie + BM Transmission zoonotique hautement probable mais modes de transmission encore inconnus projet multidisciplinaire ANR HEVZOONEPI ü Formes chroniques : modèle inattendu pour étudier les mécanismes de persistance virale Synthèse

30 Remerciements Laboratoire de Virologie Florence Abravanel Martine Dubois Jean-Michel Mansuy Services dHépatologie & Médecine Interne Jean-Marie Péron Laurent Alric Service de Néphrologie & Transplantation Nassim Kamar Lionel Rostaing


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