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Diagnostic biologique de linfection à HEV XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008 Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de Toulouse & INSERM.

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1 Diagnostic biologique de linfection à HEV XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008 Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de Toulouse & INSERM U563

2 Mr D John 62 ans Australien en France depuis 4 ans Consulte son médecin généraliste pour un ictère ATCD : –diabète de type 2 sous metformine et diamicron depuis 2 ans Habitudes de vie: –consommation dalcool 30 à 40 g/j –Habite sur une péniche sur le Canal du Midi

3 Fièvre à 38°C et céphalées Ictère depuis 2 j Prise de 1 g de paracétamol la veille de lhospitalisation Biologie : –ASAT : 4500 UI/l –ALAT : 5000 UI/l –Phos Alc : N – GT : 133 UI/l –TP : 26% CAT pratique ?

4 Afrique-Asie-Amérique centrale endémie élevée épidémies avec transmission hydrique cas sporadiques Pays industrialisés cas sporadiques : autochtones >> importés régions endémiques Boutrouille JCM 07 ; Mansuy JMV 08 Circonstances épidémiologiques

5 Exposition directe à un réservoir animal liée à une activité professionnelle ou de loisir Habitudes alimentaires Exposition environnementale Facteurs de risque

6 Hépatite symptomatique : ictère, fièvre, asthénie, nausées, vomissements,… Formes particulières : manifestations articulaires, thrombopénie Formes asymptomatiques : élévation des ALAT Circonstances cliniques

7 Femme enceinte Hépatopathie chronique sous-jacente Immunodépression thérapeutique : chimiothérapie anticancéreuse ou transplantation Facteurs de gravité

8 Outils virologiques Diagnostic direct Dépistage génomique Sang Selles Diagnostic indirect Dépistage sérologique IgG IgM

9 Cinétique des marqueurs après infection symptômes 10 2030405060 jours3 4 mois Transaminases IgM IgG virémie virus dans les selles contage

10 Niveau dendémie national ou régional recherche ou non des marqueurs HEV en 1 ère ligne Tests disponibles au laboratoire NABM : Anticorps anti-HEV : B70 ARN HEV : BHN 250 Dalton Lancet 07 ; De Silva JMV 08 Stratégie diagnostique

11 Tests sérologiques & antigènes utilisés Génotype 1, 2 1 Ag recombinant Peptide synthétique Ag recombinant Genelabs Adaltis MP Diagnostics 91-123 101-123 II 619-660 573-660 III 394-660 ORF 2.1

12 Trousses EIAgen IgM HEV Adaltis IgM HEV ELISA MP Diagnostics Assure HEV IgM Rapid test MP Diagnostics Panels Panel A : 50 sérums ARN HEV (+), G3 Panel B : 406 sérums IgG ARN HEV (-) anti-HEV (-) Evaluation des tests IgM anti-HEV

13 Microplaque Adaltis Microplaque MP Diagnostics Echantillons ARN HEV (+) 941644545Total (n=50) 544545Negatif (n=9) 437239140Positif (n=41) négatifpositifnégatifpositifnégatifpositif Test rapide MP Diagnostics IgM anti-HEV anti-HEV IgG

14 Performance 97.8100 82 Test rapide MP Diagnostics 98.595.799.588 Microplaque MP Diagnostics 98.8100 90 Microplaque Adaltis Spécificité % Sensibilité % VPN % VPP %

15 Quantification des IgG dilutions de raison 2 / UA ou UI Avidité des IgG urée 5M IgA Western-blot Tests sérologiques spécialisés Rendall JMV 08 ; Zhang JMV 02 ; Takahashi JCM 05

16 Détection ARN HEV : RT-PCR conventionnelle RT-PCR temps réel tests non commercialisés / protocoles validés / EEQ essentiel amorces / sonde ORF2 limite de détection 500 c/ml Mansuy JCM 04 ; Mansuy JMV 04 Quantification ARN HEV : RT-PCR temps réel Caractérisation ARN HEV par séquençage Tests moléculaires

17 Sang : prélèvement de choix Selles : gain de 15 % vs sang uniquement Salive : rarement positif Echantillons pertinents

18 0 5 10 15 20 25 0 50 100 150 200 250 300 1 2 3 4 200320042005200620072003 to 07 Trimesters Periods Number of cases Rainfall (mm) Hépatites E aiguës en Midi-Pyrénées Mansuy JCV 08

19 Données cliniques Démographie H/F : 41/21 Age : 58 (20-82) Symptômes Jaunisse Asthénie Fièvre Arthromyalgie Douleur abdominale Céphalée Nausée Anorexie Perte de poids Diarrhée Eruption (%) 67.7 40.3 27.4 21 11.3 9.7 8.1 6.5 4.8 3.2

20

21 Evolution chronique dans 2 situations : Chimiothérapie anticancéreuse Peron JGH 06 ; Tamura Hepatol Res 07 Transplantation Kamar NEJM 08 ; Haagsma Liver Transpl 08 Progression vers la cirrhose possible : Gerolami NEJM 08 ; Kamar AJT 08 Hépatites E chez limmunodéprimé

22 A B C Lésions histologiques Hépatite aiguë Hépatite chronique après 15 mois dévolution Cirrhose E après 3 ans dévolution Kamar AJT 08

23 Diversité du génotype 3 Capside ORF3 ORF2 ORF1 M YPVXHR HV ORF1RdRpORF2 Région hypervariable Polymérase Capside

24 région ORF2 348nt 3f 3b 3c 3e 2 1 4 3 Souches humaines locales Souches porcines

25 ORF1 Région RdRp 383 nt 0.1 AF444002-1b-Pakistan L25595-1b-China M80581-1b-Pakistan L08816-1b-China M94177-1b-China D11092-1b-China D11093-1b-China X98292-1b-China AF076239-1a-India AF459438-1a-India D10330-1a-Burma M73218-1a-Burma AF051830-1a-Nepal X99441-1a-India AF185822-1a-Pakistan AY204877-1e-Chad AY230202-1d-Morocco M74506-2-Mexico AB091395-4c-Japan AB099347-4c-Japan AB200239-4c-Japan AB09781-4c-Japan AB080575-4c-Japan AB097811-4cJapan-swine AB074915-4c-Japan AB074917-4c-Japan AB161718-4c-Japan AB161717-4c-Japan AB108537-4e-China AJ272108-4d-China AY594199-4d-China-swine AB189071-3b-Japan-deer AB189073-3b-Japan AB189074-3b-japan AB189075-3b-Japan AB189072-3b-Japan AB189070-3b-Japan-boar AP003430-3b-Japan AB091394-3b-Japan TLS39 AB074918-3a-Japan AB074920-3a-Japan AB089824-3a-japan AF060668-3a-USA AF082843-3a-USA-swine AB073912-3a-Japan-swine AY115488-3j-Canada-swine TLS41 TLS40 AF455784-3-Kyrgyzstan-swine TLS38 AB248520-3e-Japan TLS42 AB248522-3e-Japan-swine TLS36 TLS35 TLS37 TLS31 TLS32 TLS33 TLS34 TLS28 TLS19 TLS12 TLS10 TLS11 TLS14 TLS13 TLS6 TLS8 TLS3 TLS2 TLS1 TLS5 TLS4 TLS7 TLS9 TLS18 TLS16 TLS15 TLS30 TLS29 TLS27 TLS26 TLS25 TLS24 TLS23 TLS22 TLS21 TLS20 100 94 91 78 89 98 100 1 2 4 3 Souches humaines locales Souches porcines 3f 3b 3c 3e

26 ORF1 Région HVR 345 nt 0.1 AF444002-1b-Pakistan M80581-1b-Pakistan L25595-1b-China D11092-1b-China L08816-1b-China M94177-1b-China D1109-1b-China X98292-1b-China AF076239-1a-India AF459438-1a-India X99441-1a-India AF051830-1a-Nepal M73218-1a-Burma D10330-1a-Burma AF185822-1a-Pakistan AY204877-1e-Chad AY230202-1d-Morocco M74506-2a-Mexico AB091395-4b-Japan AB200239-4c-Japan AB099347-4b-Japan AB097811-4b-Japan-swine AB097812-4b-Japan AB080575-4b-Japan AB074917-4c-Japan AB161718-4c-Japan AB161717-4c-Japan AB074915-4c-Japan AJ272108-4e-China AY594199-4d-China-swine AB108537-4e-China AF455784-3g-Kyrgyrstan-swine AB248522-3e-Japan-swine AB248520-3e-Japan TLS42 AB189074-3b-Japan AB189075-3b-Japan AB189073-3b-Japan AB189070-3b-Japan-boar AP003430-3b-Japan AB091394-3b-Japan AB073912-3b-Japan-swine AB074918-3a-Japan AB074920-3a-Japan AB089824-3a-Japan AF082843-3a-USA-swine AF060668-3a-USA AY115488-3j-Canada-swine TLS39 TLS41 TLS40 TLS38 TLS32 TLS33 TLS34 TLS28 TLS31 TLS36 TLS37 TLS35 TLS25 TLS26 TLS24 TLS23 TLS21 TLS22 TLS20 TLS29 TLS30 TLSE19 TLS27 TLS17 TLS18 TLS16 TLS15 TLS04 TLS05 TLS07 TLS08 TLS06 TLS13 TLS14 TLS12 TLS10 TLS11 TLS09 TLS02 TLS03 TLS01 100 99 78 100 75 1 2 4 3 Souches humaines locales Souches porcines 3f 3b 3c 3e

27 0.1 AB189071-3b-Japan-deer AB189072-3b-Japan AB189070-3b-Japan-boar AP003430-3b-Japan AB091394-3b-Japan AB073912-3b-Japan-swine AB074918-3a-Japan AB074920-3a-Japan AB089824-3a-Japan AF060668-3a-USA AF082843-3a-USA-swine AY115488-3j-Canada-swine AB290312-3-Mongolia-swine AB248522-3e-Japan-swine AB248521-3e-Japan-swine AB248520-3e-Japan TLS25 AF455784-GC-3g-kyrgyrztan-swine AB099347-4c-Japan AB200239-4c-Japan AB097812-4c-Japan AB097811-4c-Japan-swine AB080575-4c-Japan AB074917-4c-Japan AB161718-4c-Japan AB161717-4c-Japan AB074915-4c-Japan AB108537-4g-China AJ272108-4d-China AY594199-4d-China-swine M74506-2a-Mexico AY204877-1e-Chad AY230202-1d-Morocco L08816-1b-China M94177-1b-China L25595-1b-China D11092-1b-China D11093-1b-China X98292-1b-China AF185822-1a-Pakistan AF051830-1a-Nepal X99441-1a-India AF076239-1a-India AF459438-1a-India D10330-1a-Burma M73218-1a-Burma Génome complet 100 93 100 3 4 1 2 Souches humaines locales Souches porcines 3f 3e 3b 3a Abravanel EID sous presse

28 Transmission nosocomiale ? Mansuy CID sous presse

29 HEV constitue un pathogène émergent pour les pays industrialisés justifiant une stratégie diagnostique adéquate : sérologie + BM Transmission zoonotique hautement probable mais modes de transmission encore inconnus projet multidisciplinaire ANR HEVZOONEPI ü Formes chroniques : modèle inattendu pour étudier les mécanismes de persistance virale Synthèse

30 Remerciements Laboratoire de Virologie Florence Abravanel Martine Dubois Jean-Michel Mansuy Services dHépatologie & Médecine Interne Jean-Marie Péron Laurent Alric Service de Néphrologie & Transplantation Nassim Kamar Lionel Rostaing


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