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DÉTECTION ANTIGÈNE/ANTICORPS Projet de biologie Moléculaire BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia 15/04/2011.

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1 DÉTECTION ANTIGÈNE/ANTICORPS Projet de biologie Moléculaire BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia 15/04/2011

2 Objective Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment. Get a refraction index that indicates the bonding between the antibody in the surface and the peptides present. Follow the interaction between an immobilized peptide and an antibody in solution by using a surface Plasmonic Resonance.

3 Surface Plasmon Resonance Angle OrPrisme I0I0 I I/I 0 Angle Mesure de langle de résonance du prisme Langle de résonance est due à lapparition dune onde évanescente (plasmon) Angle de résonance

4 Surface Plasmon Resonance Les plasmons sont sensibles à la masse des éléments à la surface de la couche métallique Ainsi langle de résonance change en fonction de la masse accrochée à lor

5 Protocole expérimental Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme Etape 2 : Dépôt des peptides Etape 3 : Vérification de lhomogénéité Etape 4 : SPR

6 Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme Prisme dor simple Nettoyage du prisme au plasma Bain dans laminothiol Lavage Prisme dor fonctionnalisé

7 Etape 2 : Dépôt des peptides Peptides : Peptide K-linker-c-myc : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSEQKLISEEDL - COOH Peptide K-linker-Flag : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSDYKDDDDK – COOH Peptide K-linker-His : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSHHHHHH – COOH Dépôt au robot Blocage du prisme à léthanolamine

8 Etape 3 : Vérification de lhomogénéité Suivi par mesure de la tension de surface Après chaque étape : mesure de langle de goutte Utilisation dun goniomètre Suivi par marquage au SYPRO orange Protocole à détailler

9 Etape 4 : SPR Initialisation de lappareil Mesure de langle de résonance Passage des tampons avec les différents anticorps Obtention de courbe de réflexitivé en fonction de langle Mode pour déterminer la cinétique. Mode pour déterminer la concentration en anticorps.

10 Gestion du projet/ Gant Chart

11 Merci de votre écoute


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