Constitution d’un virus

Présentation au sujet: "Constitution d’un virus"— Transcription de la présentation:

1 Constitution d’un virus

2 Structures génétique des virus
Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN- Structure : Trans Expression Encapsidation: PSI:  Cis Réplication

3 Génes structuraux Transgène

4 Virus défectif Virus défectif Virus réplicatif Pas de production de nouvelles particules

5 Les vecteurs dérivés des rétrovirus

6 Famille des rétrovirus
Oncoretrovirinae (rétrovirus simple) 5 genres Moloney Murine Leukemia virus Rous Sarcoma virus Lentiviridae (rétrovirus complexe) Virus de l’Immunodéficience Humaine (V.I.H) Spumaviridae Virus Foamy

7 Les oncorétrovirus rétrovirus simple

8 Structure du génome viral
Intégration Transcription Recrutement dans la particule virale Initiation de la transcription inverse Protéines virales Transcription inverse

9 Le cycle de réplication
Transcription inverse

10 Le cycle de réplication

11 Intégrase N-terminal C-terminal Domaine catalytique

12 L’intégration (2)

13 Le cycle de réplication


14 Etapes communes aux rétrovirus
Entrée Transcription inverse/ intégration Mobilisation d’une information génétique dans une particule

15 Définitions Transgène Séquences virales
Les séquences cis sont les séquences associées au transgène Les séquences trans sont les séquences utiles pour la production du vecteur, mais clonées dans un autre système d’expression

16 Elaboration d’un vecteur
Séquences cis : « initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration Séquences cis : « initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration Séquences indispensables Production de particules recombinantes Transfert de l’information génétique

17 Les vecteurs Séquences cis SA

18 Dans la cellule productrice
SA Transcription SA 5’m7G AAAA ARN mobilisable dans une particule rétrovirale

19 Dans les cellules cibles
SA 5’m7G AAAAA Transcription inverse Intégration SA Provirus intégré dans la cellule cible

20 Les systèmes de transcomplémentation
Les séquences trans: protéines structurales enzymes (RT, IN, PR) Structurer la particule virale Cycle de réplication

21 Production transitoire
SA Transfection AA Virus recombinants capables de transduire des cellules cibles

22 Pseudotypage Tropisme: spécificité de reconnaissance de la cellule cible  déterminant: la glycoprotéine d’enveloppe Pseudotypage: utilisation d’une glycoprotéine d’enveloppe différente de celle du virus parental  modification du tropisme du vecteur  enveloppes plus résistantes aux techniques de purification Exemple: rétrovirus pseudotypés par la glycoprotéine d’enveloppe du virus de la stomatite vésiculeuse (VSV-G)

23 Rétrovirus et cycle cellulaire
Interphase Prophase Métaphase Télophase Rétrovirus HIV FIV SIV ASV MoMLV peu trés Dépendance au cycle cellulaire

24 Les vecteurs lentiviraux
Famille : Retroviridæ Genre : Lentivirus Sous-espèces: -HIV 1 -HIV 2 -SIV -FIV -BIV -VISNA -CAEV -EIAV

25 Spécificité du cycle des lentivirus
MoMLV V.I.H ppT central

26 Sites d’intégration des lentivirus

27

28 Transactivation 28

29

30 Les vecteurs SIN P P ARN mobilisé P
Vecteur intégré dans les cellules transduites 30

31 Les rétrovirus Mammalian C-type Lentivirus Spumavirus Avian C-type
BLV/ HTLV D-type B-type Premiers vecteurs 31

32 Un exemple d’application des vecteurs rétroviraux
Traitement du déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (X-SCID): déficit: chaîne  du récepteur aux interleukines 2, 4, 7, 9 et 15 déficit immuntaire majeur traitement: greffe de moelle allogénique Vecteur rétroviral: SA Chaîne  C ILR