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Constitution d’un virus. Structures génétique des virus Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN- Encapsidation: PSI:  Expression Réplication Structure.

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1 Constitution d’un virus

2 Structures génétique des virus Type de génome: ADN; ADNsb; ARN+, ARN- Encapsidation: PSI:  Expression Réplication Structure : Cis Trans

3 Génes structuraux Transgène

4 Virus défectif Virus réplicatif Virus défectif Pas de production de nouvelles particules

5 Les vecteurs dérivés des rétrovirus

6 Famille des rétrovirus Oncoretrovirinae (rétrovirus simple) 5 genres Moloney Murine Leukemia virus Rous Sarcoma virus Lentiviridae (rétrovirus complexe) Virus de l’Immunodéficience Humaine (V.I.H) Spumaviridae Virus Foamy

7 Les oncorétrovirus rétrovirus simple

8 Structure du génome viral Recrutement dans la particule virale Initiation de la transcription inverse Protéines virales Transcription inverse Intégration Transcription Intégration

9 Le cycle de réplication Transcription inverse

10 Le cycle de réplication

11 Intégrase Domaine catalytique N-terminal C-terminal

12 L’intégration (2)

13 Le cycle de réplication   

14 Etapes communes aux rétrovirus Entrée Transcription inverse/ intégration Mobilisation d’une information génétique dans une particule

15 Définitions Transgène Séquences virales Les séquences cis sont les séquences associées au transgène Les séquences trans sont les séquences utiles pour la production du vecteur, mais clonées dans un autre système d’expression

16 Elaboration d’un vecteur Séquences cis :« initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration Séquences indispensables Production de particules recombinantes Transfert de l’information génétique Séquences cis :« initiation de la transcription » encapsidation dans la particule virale transcription inverse intégration

17 Les vecteurs Séquences cis SA

18 Dans la cellule productrice SA ARN mobilisable dans une particule rétrovirale Transcription 5’m7G AAAA SA

19 Dans les cellules cibles SA Transcription inverse Intégration Provirus intégré dans la cellule cible 5’m7G AAAAA

20 Les systèmes de transcomplémentation Les séquences trans:protéines structurales enzymes (RT, IN, PR) Structurer la particule virale Cycle de réplication

21 Production transitoire Virus recombinants capables de transduire des cellules cibles Transfection AA SA

22 Pseudotypage Tropisme: spécificité de reconnaissance de la cellule cible  déterminant: la glycoprotéine d’enveloppe Pseudotypage: utilisation d’une glycoprotéine d’enveloppe différente de celle du virus parental  modification du tropisme du vecteur  enveloppes plus résistantes aux techniques de purification Exemple: rétrovirus pseudotypés par la glycoprotéine d’enveloppe du virus de la stomatite vésiculeuse (VSV-G)

23 InterphaseProphaseMétaphaseTélophase Rétrovirus Dépendance au cycle cellulaire HIVFIVSIVASVMoMLV peutrés Rétrovirus et cycle cellulaire

24 Les vecteurs lentiviraux Famille : Retroviridæ Genre : Lentivirus Sous-espèces: -HIV 1 -HIV 2 -SIV -FIV -BIV -VISNA -CAEV -EIAV

25 MoMLVV.I.H Spécificité du cycle des lentivirus ppT central

26 Sites d’intégration des lentivirus

27

28 Transactivation

29

30 Les vecteurs SIN P P ARN mobilisé P Vecteur intégré dans les cellules transduites

31 Les rétrovirus Spumavirus Mammalian C-type Mammalian C-type Lentivirus D-typeB-type Avian C-type BLV/ HTLV Premiers vecteurs

32 Un exemple d’application des vecteurs rétroviraux Traitement du déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (X-SCID): déficit: chaîne  du récepteur aux interleukines 2, 4, 7, 9 et 15 déficit immuntaire majeur traitement: greffe de moelle allogénique Vecteur rétroviral: SA Chaîne  C ILR


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