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GROUPE III Camille Roger, Emma Castel, Daniela Camargo, Kelly Blasco, Sandrine Rivrain, Christophe Le Gros, Laurent Esnault, Boris Guédel, Ciprian Davidescu.

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1 GROUPE III Camille Roger, Emma Castel, Daniela Camargo, Kelly Blasco, Sandrine Rivrain, Christophe Le Gros, Laurent Esnault, Boris Guédel, Ciprian Davidescu.

2 I. Transformation Objectifs : ajout du plasmide contenant le gène GFP à une bactérie. bactérie Gène codant pour la GFP ADN plasmidique Gène de résistance à la Kanamycine

3 II. Ensemencement Objectifs : culture de bactéries transformées et non transformées. L'échantillon T absence de colonies sur milieu avec Kana. Ne correspond pas au témoin. Conclusion : problème au niveau de la transformation. Transformation des bactéries à refaire. TémoinsÉchantillons T+K + IPTG T NT+K NT

4 Deuxième culture bactérienne NT+K TémoinsEchantillons NT T+IPTG T+IPTG+KT+IPTG T+K Conclusion : expérience réussie. Les bactéries que nous souhaitions transformer se sont développées dans un milieu avec kanamycine, elles ont incorporé le plasmide : transformation réussie.

5 Objectifs : récupération du plasmide présent dans les bactéries transformées. III. Isolation et purification du plasmide

6 IV. Double digestion Objectifs : séparation du gène GFP de lADN plasmidique. On effectue cette séparation grâce aux enzymes Hind III et Bam H1. gène de résistance à la Kanamycine

7 V. Électrophorèse Objectifs : vérification de la présence du gène de la GFP dans le plasmide et du fonctionnement des enzymes. Principes: Le gel dagarose permet de différencier les fragments dADN selon leur taille.

8 Résultats de la première lélectrophorèse Marqueur de poids moléculaire Plasmide digéré Plasmide non digéré Bactéries non transformées

9 Résultats de la seconde électrophorèse Marqueur de poids moléculaire Simple digestion avec Hind III Simple digestion avec Bam H1 Double digestion HHHBBBB HB Gène GFP


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