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Microbiologie LÉtude des Microorganismes. Définition dun Microorganisme Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» –Organisme microscopique.

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1 Microbiologie LÉtude des Microorganismes

2 Définition dun Microorganisme Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» –Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) –Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires 2

3 Micro_? 3 Rotifère Atome 0.1nm 1 nm 10 nm 100 nm 1 µm 10 µm 100 µm 1 mm 1 cm 0.1 m Acide aminé Protéine Virus Chloroplaste Bactérie Cellule de plante et animale Fourmis Microscope électronique Lœil humain Microscope optique

4 _Organisme? Qui est vivant –Possède un métabolisme Qui peut vivre de façon indépendante –Nest pas lunité dune organisation multicellulaire Parasite obligatoire?

5 Eubactéries Pathogènes qui peuvent causer une maladie Bactéries du sol, eau, air, tube digestif, etc. Peuvent utiliser loxygène ou pas Composés organiques et inorganiques utilisés comme source de carbone Composés organiques ou inorganiques utilisés comme source dénergie Certaines peuvent se différentier –ex. Bacillus et Clostridium - Sporogénèse 5

6 Travailler en Microbiologie La Technique Stérile

7 1 re Étape Se laver les mains aussitôt que vous entrez dans le laboratoire –Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle

8 2 e Étape Faire la désinfection de votre espace de travail –Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement

9 Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile –Milieu de culture –Éprouvettes –Assiettes de Pétris –Boucle densemencement –Etc.

10 3 e Étape Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes –Préviens la contamination de vos cultures –Préviens la contamination de votre environnement –Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

11 Transferts par la Technique Stérile Stériliser la boucle densemencement au bruleur –Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle densemencement

12 Transferts par la Technique Stérile Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle dinoculation –Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

13 Transferts par la Technique Stérile Chauffer louverture du tube au bruleur –Garder lorientation du tube aussi prêt de lhorizontal que possible –Garder louverture du capuchon vers le bas Réchauffement de louverture

14 Transferts par la Technique Stérile Utiliser la boucle stérile pour retirer linoculum –Liquide de bouillons –Solide de géloses –Solide de pentes Retirer linoculum

15 Transferts par la Technique Stérile Chauffer louverture du tube au bruleur encore une fois! –Garder lorientation du tube aussi prêt de lhorizontal que possible Réchauffement de louverture

16 Transferts par la Technique Stérile Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

17 Transferts par la Technique Stérile Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube –Retirer capuchon –Chauffer louverture –Inoculer –Chauffer louverture –Fermer le tube Inoculation

18 Inoculation dune Gélose Garder la boucle à lextrémité du fil densemencement parallèle avec la surface de la gélose Faire des stries de gauche à droite à 12:00

19 Transferts par la Technique Stérile Restériliser la boucle densemencement au bruleur –Le fil entier doit devenir rouge Déposer sur la table si vous avez fini! Boucle densemencement

20 Stries pour Colonies Simples

21 Microorganismes en Laboratoire Les Milieux de Croissance

22 Buts Croissance sous des conditions contrôlées Maintien Isolation de cultures pures Tests métaboliques

23 Types Liquides (bouillons) –Permets la culture en suspension –Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres –Permets la croissance de grands volumes

24 La Croissance en Bouillon Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Limpide + sédiment Turbide

25 Milieux Solides Agents de solidifications –La gélatine Protéine Source animale Solide à des températures < 28 o C –Lagar Polysaccharide dérivé dune algue Demeure solide à >37 o C Fond à 100 o C

26 Croissance sur Géloses dAgar Croissance sur surface solide Croissance isolée Permets lisolation de colonies simples Permets lisolation de cultures pures Colonie simple

27 Les colonies sont originaires de cellules uniques de différentes bactéries puisquune colonie étalée de façon répétée génère des colonies identiques

28 Milieux Solides (suite) Croissance sur pente –Croissance en surface et en profondeur –Différentes disponibilités doxygène –Entreposage à long terme

29 Milieux Solides (suite) Tube profond –Milieu semi-solide –Entreposage à long terme –Faible disponibilité doxygène

30 La Microscopie Les Colorations

31 Les Colorants Cationique : Chargés positivement –Interagissent avec les groupements négatifs des membranes plasmiques Ex. Bleu de méthylène, cristal violet, safranine, vert de malachite Coloration Positives :Anionique : Chargés négativement –Interagissent avec le substrat de fond Noir de nigrosin, encre dInde Coloration Négatives

32 Colorations Positives Coloration du spécimen –Coloration indépendante de lespèce A B

33 Colorations Négatives Coloration de lenvironnement de fond –Coloration indépendante de lespèce A.Grand bacille B.Petit bacille

34 Méthodes Coloration simple: –Un seul agent de coloration –Colorant cationique ou anionique –Permet de déterminer la taille, la forme, et larrangement des cellules

35 Les Formes Cellulaires Coccus: –Sphères –Division sur 1,2 ou 3 plans –Nombre de plans de division donne différents arrangements –Arrangements typiques de différents genres bactériens

36 Les Cocci (Coccus) Diplococcus Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus ArrangementsPlans de division

37 Les Formes Cellulaires (suite) Bacilles: –Bâtonnets –Division sur 1 plan seulement –Arrangements typiques de différents genres bactériens

38 Les Bacilles Diplobacille Streptobacille ArrangementsPlans de division

39 Compter les Microorganismes

40 Méthodes Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

41 Comptes Viables Dilutions en séries de léchantillon Étalement des dilutions sur milieu approprié Chaque colonie simple est originaire dune unité formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans léchantillon

42 Dilutions pour Comptes Viables

43 63 UFC/0.1mL de UFC/1.0mL de UFC/ml X 10 5 = 6.3 x 10 7 /ml dans léchantillon original

44 :Avantages: –Dénombre les microorganismes viables –Peu distinguer différents microorganismes Limites: –Pas de milieu universel –Nécessite la croissance du microorganisme –UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus un de E.coli = ?


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