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BIO1540 Lab 4 : Mitose. Objectifs du laboratoire Visualiser lADN grâce à une technique de coloration Identifier et comparer les stades du cycle cellulaire.

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1 BIO1540 Lab 4 : Mitose

2 Objectifs du laboratoire Visualiser lADN grâce à une technique de coloration Identifier et comparer les stades du cycle cellulaire sur des échantillons animaux et végétaux. Déterminer la durée relative de chacune des phases du cycle cellulaire

3 Phases de la mitose chromosomes condensés (visibles) Membrane nucléaire se dégrade (mais présente) Chromosomes non visibles Nucléole présent Chromosomes visibles Membrane nucléaire a disparu Comptés comme prophase

4 Phases de la mitose Cytocinèse Copyright © 2008 Pearson Cummings. All rights reserved Chromosomes alignés au niveau de la plaque équatoriale Les chromatides soeurs se séparent et commencent à migrer vers les pôles Les chromosomes disparaissent et une nouvelle membrane nucléaire se forme Cytoplasme se divise Les cellules filles se séparent

5 Programme du lab 4: Coloration de la racine de fève (Vicia faba) Identification et comptage des stades mitotiques: – blastula de corégone (Coregonus clupeaformis) – racine doignon (Allium cepa) – Préparation de la racine de fève (Vicia faba) - méthode squash Entrée des données de la classe

6 Préparation de la racine de fève (Vicia faba) Matériel fourni: Racines de fèves fixées dans du fixatif Carnoy-lebrun (stoppe les processus cellulaires et préserve les tissus). Protocole détaillé de la coloration dans le manuel de laboratoire Étape 1: Inscrivez votre nom sur le microtube avant de commencer la procédure de coloration. Étape 2: Ôtez le fixatif en utilisant la pipette en plastique. Jetez le liquide dans la poubelle de déchets liquides. Utilisez le cure-dent pour maintenir la racine dans le tube si nécessaire.

7 Préparation de Vicia faba Étape 3: Rinçages – Rincez les racines une fois dans de lalcool (EtOH) 95% puis enlevez lalcool à laide de la pipette. Étape 4: Hydrolyse – Ajoutez du HCl 1N préchauffé aux racines. – Incubez à 60°C pendant 10 minutes précises. – Ôtez le HCl puis ajoutez délicatement de leau glacée pour arrêter lhydrolyse

8 Préparation de Vicia faba Étape 5: Coloration Jetez leau de létape 4 Ajoutez du colorant de Feulgen – Attention il colore quasiment tout instantanément. Colorez pendant minutes. Ôtez le colorant en utilisant la pipette en plastique et rincez 2-3 fois avec de leau distillée. Conservez les racines colorées dans de leau (ne laissez pas sécher)

9 Préparation de Vicia faba Étape 6 : écrasement de la racine Ajoutez 1 goutte dacide acétique sur la lame Déposez une racine A laide dune lame de rasoir, coupez 2mm de lextrémité foncée de la racine. Jetez le reste Montez avec une lamelle

10 Étape 7: Écrasement Pressez fermement en appliquant une pression verticale. Ne faites pas glisser la lamelle latéralement. Vérifiez sous le microscope que la préparation et correcte et pressez à nouveau si nécessaire Préparation de Vicia faba

11 Évaluation de la préparation Montrez votre préparation à votre démonstrateur / trice Présentez une photo de votre préparation pour être évaluée (luminosité, balance des couleurs, mise au point….). Choisissez votre meilleure image.

12 Comptage des cellules Sous lobjectif 40x, comptez le nombre de cellules dans chacune des phases du cycle cellulaire. Comptez au moins 50 cellules (prenez une photo au 40X et comptez à lécran) Répétez le comptage deux autres fois ou jusquà ce que le nombre final de cellules = 150 pour chaque spécimen.

13 Comptage des cellules Entrez vos résultats au fur et à mesure dans les feuilles Excel sur les ordinateurs Commencez par une des deux lames préparées (soit loignon ou la corégone) puis observez votre préparation de racine de haricot.

14 40 min Pointe de racine doignon (Allium cepa)

15 biopsy/images/mitosis.jpg Attention, les lames sont épaisses Blastula de corégone (Coregonus clupeaformis) 30 min

16 Évaluation du La4 Questionnaire pré-lab Note technique: compte pour 20% de la note. Vous serez évalué(e) sur: Propreté Bonne utilisation du microscope Bonne qualité de lécrasement de la racine de fève Bonne qualité de la photo montrée à votre démonstrateur / trice Rapport de laboratoire Noubliez pas: – Les liquides vont dans le Becher de déchets – Les lames vont dans la poubelle de verre brisé Portez vos lunettes de sécurité

17 Report Lab 4: voir instructions sur le site web des laboratoires Report – 3 Pages Page de titre Un graphique à barre sur deux panneaux présentant le % de cellules dans chacun des stades du cycle cellulaire, ceci pour les 3 organismes: Panneau supérieur: données de la classe plus lerreur type (affichées sur le site web des labs) Panneau du inférieur: vos propres mesures (calculez le % de cellules dans chacun des stades)

18 Panneau supérieur: Données de la classe (moyenne PLUS erreur type) Panneau inférieur: Données personnelles clé des symboles 1 1 Axe des X: Stades du cycle cellulaire Axe des Y: Pourcentage de cellules Graphique sur deux panneaux: Même règles quun graphique sur un panneau sauf: Les deux graphiques partagent le même axe Y. Les 2 axes X ont des marques de division mais létiquette est seulement présentée sur laxe du bas. La même échelle est présentée sur les deux panneaux Ceci nest pas un graphique parfait juste un exemple. Graphique fait à la main Sur papier millimétré Noubliez pas la légende. série 1 série 2 série Noubliez pas la légende sous le graphique

19 Rapport du lab 4 (suite) Page 3. Conclusion basée sur les données du graphe: – Brève comparaison de la longueur des phases du cycle cellulaire entre les 3 organismes, entre les données de la classe et personnelles – Répondez à la question: En vous basant sur vos observations durant le laboratoire, comment pourriez- vous évaluer la durée relative de chacun des stades du cycle cellulaire pour chacune des 3 espèces observées ? Texte de la page 3: maximum 2/3 de page (12 pts, interligne 1.5 = 15 lignes).

20 Rapport du lab 4 (fin) Les données combinées seront postées demain sur le site web DATE DE REMISE: Dans une semaine.


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