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UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi.

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1 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi UICC HPV and CERVICAL CANCER CURRICULUM

2 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 01 Chapitre 2.d. Dépistage et Diagnostic Recherche et identification des virus HPV Prof. Suzanne Garland MD Director of Microbiological Research, Head of Clinical Microbiology and Infectious Diseases The Royal Women's Hospital Melbourne, Australia Associate Prof. Sepehr Tabrizi Senior Research Scientist, Department of Microbiology The Royal Women's Hospital Melbourne, Australia

3 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 02 Des particules identiques au virus ( virus like particles :VLPs) Analogues non infectieux de virus pathogènes VLP-L1 assemblés in vitro dans des capsides virales vides ou VLPs La production de ces VLPs nest pas standardisée Différents systèmes dexpression, de méthodes de préparation, et de contrôle de qualité sont utilisés Les formats didentification varient (direct vs. indirect) Pas de gold-standard pour définir la positivité Peu de comparaisons inter-laboratoires

4 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 03 Virus-like particles (VLPs) Les VLPs peuvent être analysées en utilisant la microscopie électronique

5 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 04 Détection des anticorps HPV Anticorps Leur présence traduit une infection passée ou présente Ils peuvent être induits par les protéines virales précoces (E) ou tardives (L) Lanticorps neutralisant L1 est celui qui confère au vaccin son rôle préventif.

6 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 05 Détection des anticorps HPV Différents tests ont été développés pour détecter les anticorps dans le sérum ou dans la muqueuse cervicale : Enzyme liée à un immuno-absorbant (test ELISA): mesure les Immunoglobulines (Ig) totales, neutralisantes et non neutralisantes Test de liaison compétitive, i.e. essai Luminex (cLIA): mesure les Ig neutralisantes au niveau dun seul épitope, mais toutes les classes dIg. Test avec pseudo-virion : mesure toutes les sous-classes des Ig neutralisantes totales, Test Western blot Radio-immuno-précipitation

7 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 06 Détection de lHPV DNA dans les tissus par microscopie Immuno-histochimie (antigène spécifique de groupe) Frottis cervical : détecte les cellules pré-cancéreuses

8 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 07 Détection de l HPV DNA par des Techniques Moléculaires Méthodes d amplification Amplification du Signal Hybride Capture (HC2) Amplification de la cible PCR (Polymerase chain reaction) HPV DNA HPV mRNA (acide ribonucléique messager)

9 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 08 Test Hybride Capture 2 Actuel test approuvé par la FDA 1995 format tube ; 1999 format micro-titre Utilisant les cellules cervicales exfoliées Le matériel recommandé pour le prélèvement comprend une brosse et le milieu de transport Le prélèvement doit contenir des cellules endo et exo cervicales

10 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 09 Test Hybride Capture 2 Il a la sensibilité dun échantillon contenant 5000 génomes Sondes de type bas risque HPV types 6, 11, 42, 43, 44 Sondes de type haut risque HPV types 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 and 68 Résultats non spécifiques du type dans le groupe HR ou BR Pas de contrôle sur le nombre de cellules recueillies Bonne comparaison inter laboratoire

11 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 10 PCR:Polymerase Chain Reaction Très sensible: 1-10 copies /100,000 cellules Permet de tester divers échantillons Permet aussi de tester des échantillons archiver et dont la qualité du DNA est pauvre Consensus sur le test : La cible est généralement la région L1 Mais - Les initiateurs damplification (primers) varient: MY09/MY11 SPF1/SPF2 PGMY09/PGMY11 GP5+/GP6+ Le système de détection varie: ELISA Dot blot

12 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 11 Différentes techniques de PCR Test AMPLICOR ® HPV LINEAR ARRAY® HPV Test INNO-LiPA ® Genotyping Génotypage HPV sur pièce en paraffine Les Tissus peuvent être vieux et le DNA dégradé (y compris durant lextraction)

13 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 12 Différentes techniques de PCR HPV DNA Chip format (Bio-puce) HPV Microarray (Puce à ADN)

14 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 13 Autres méthodes de détection des types dHPV Luminexs xMAP® Norchip - HPV Proofer

15 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 14 Limitations et challenges Divers niveaux de test Différentes sensibilité et spécificité Manque de contrôles, et dassurance de Qualité

16 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 15 Utilisation pratique des tests de détection des HPV Clinique Dépistage Triage des frottis douteux ou difficile (ASCUS) Suivi après traitement des CIN (néoplasie intra-epithéliale) Epidémiologie Surveillance géographique Taux de prévalence des différents HPV dans le monde Vaccin Etude Pré- and post pour la mise en place de la vaccination Efficacité des essais de vaccination

17 UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 16 merci Cette présentation est disponible sur le site:


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