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LES INCERTITUDES DES TECHNIQUES DU GENIE GENETIQUE.

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1 LES INCERTITUDES DES TECHNIQUES DU GENIE GENETIQUE

2 Les principaux types de vaccins Vaccins issus dagents pathogènes inactivés par exposition à un agent chimique ou physique îVaccins issus dagents pathogènes atténués par multiplication en laboratoire : passages successifs dans des cellule cibles jusquà quils perdent leur caractère pathogène par acquisition de mutations îVaccins formés de constituants (protéines) dagents pathogènes obtenus à partir du sérum sanguin de donneurs qui ont été préalablement exposés à lagent pathogène en question obtenus par génie génétique

3 Gène marqueur Vecteur dexpression levure Gène de la protéine de surface Vaccination Purification de la protéine de surface Virus Transcription Traduction Protéine de surface Gène de la protéine de surface Production de vaccins par génie génétique : principe général Cellule de levure Transfection Multiplication des levures

4 Production de vaccins par génie génétique : principe général Gène marqueur Vecteur dexpression levure Gène de la protéine de surface Virus Transcription Traduction Protéine de surface Gène de la protéine de surface Cellule de levure Transfection Multiplication des levures

5 Détails de la construction génétique Gène de la protéine de surface Promoteur de gène de levure Terminateur de gène de levure

6 Détails de la construction génétique Séquence codant la protéine de surface Promoteur viral Terminateur viral Gène de la protéine de surface

7 Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Protéine S moyenne ( acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 Promoteur viral Terminateur viral Grande protéine S ( acides aminés)

8

9 Détails de la construction génétique ARG3 Séquence codant lenzyme ornithine carbamoyltransférase Gène de levure PromoteurTerminateur Petite protéine S (226 acides aminés) Protéine S moyenne ( acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 Promoteur viral Terminateur viral Grande protéine S ( acides aminés)

10 Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S Gène de levure ARG3 Séquence codant lenzyme ornithine carbamoyltransférase PromoteurTerminateur

11 Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 PromoteurTerminateur Gène de levure ARG3 Séquence codant lenzyme ornithine carbamoyltransférase PromoteurTerminateur

12 Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S Pré-S2 Pré-S1 PromoteurTerminateur Gène de levure ARG3 Séquence codant lenzyme ornithine carbamoyltransférase PromoteurTerminateur

13 Détails de la construction génétique Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S ré-S2 Terminateur Gène de levure ARG3 Séquence codant lenzyme ornithine carbamoyltransférase Terminateur Promoteur

14 Détails de la construction génétique Terminateur 42 aa 18 aa Protéine S recombinante ( acides aminés) Petite protéine S (226 acides aminés) Cas du gène S du virus de lhépatite B Gène S Promoteur Gène de levure ARG3 Séquence codant lenzyme ornithine carbamoyltransférase ré-S2

15 Paramètres non ma î tris é s dans la production de protéines par transgenèse Repliement des protéines (structure tridimentionnelle) îModifications chimiques secondaires (modifications post-traductionnelles : glycosylations, phosphorylations, …)

16 Taille des protéines de surface du virus de lhépatite B 25 kDa 33 kDa 39 kDa Non glycosylée Vaccin GenHevacB Glycosylée 29 kDa 36 kDa 41 kDa 22 kDa 26 kDa 34 kDa Petite (S) Moyenne (pré-S2 + S) Grande (préS1 + préS2 + S) A partirdu génome viral


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