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Dénombrement des bactéries en milieu liquide Méthode statistique du nombre le plus probable NPP.

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1 Dénombrement des bactéries en milieu liquide Méthode statistique du nombre le plus probable NPP

2 I. Principe Jusqu’à présent, on utilisait une méthode générale pour interpréter le dénombrement de bactéries en milieu liquide dans un aliment. Ainsi : Si le tube est + = il y a au moins une bactérie / mL de la dilution considérée Si le tube est - = il y a moins de une bactérie / mL de la dilution considérée I. Principe II. Technique III. Lecture

3 La méthode du NPP (Nombre le Plus Probable) ou MPN (Most Probable Number) utilise une méthode statistique pour connaître le nombre (le plus probable) de bactéries présentes dans 1 mL de dilution. Cette technique utilise plusieurs tubes par dilution (2, 3, 4 ou 5) et on compare les résultats à une table statistique = la table de Mac Grady qui donne le NPP sur la dilution considérée.  Il s’agit donc d’une interprétation probabiliste I. Principe II. Technique III. Lecture

4 II. Technique I. Principe II. Technique III. Lecture  Réaliser une gamme de dilution du produit analyser  Ensemencer 1 mL de chaque dilution dans plusieurs tubes (2, 3, 4 ou 5) d’un milieu liquide correctement choisi Incuber les tubes à la température adaptée (Ex : 44°C pour les coliformes thermotolérants)

5 III. Lecture I. Principe II. Technique III. Lecture  Après incubation des tubes, noter dans un tableau pour chaque tube si le résultat est positif (+) ou négatif (-). Dilutions Aspect des tubes (BLBVB + cloche) Résultats Nombre de résultats + Regroupement

6 I. Principe II. Technique III. Lecture Dilutions Aspect des tubes (BLBVB + cloche) Résultats Nombre de résultats + Regroupement  Grouper le nombre de résultats positifs par dilution 33210

7 I. Principe II. Technique III. Lecture Dilutions Aspect des tubes (BLBVB + cloche) Résultats Nombre de résultats + Regroupement Regrouper en nombre de 3 chiffres la suite de chiffres obtenue en commençant par le chiffre obtenu par la plus faible dilution

8  Choix de la dilution pour le calcul, 2 méthodes sont possibles : OU choisir la plus forte dilution contenant tous ces tubes positifs choisir la dilution qui possède le regroupement le plus grand tout en étant inférieur à : pour la méthode à 2 tubes / dilution pour la méthode à 3 tubes / dilution pour la méthode à 4 tubes / dilution (etc…) I. Principe II. Technique III. Lecture

9 I. Principe II. Technique III. Lecture Dilutions Aspect des tubes (BLBVB + cloche) Résultats Nombre de résultats + Regroupement

10 I. Principe II. Technique III. Lecture Lire la valeur du NPP dans la table de Mac Grady et en déduire la concentration des bactéries dans l’échantillon : Nombre de tubes positifs au niveau des 3 taux de dilution retenus NPP Nombre de tubes positifs au niveau des 3 taux de dilution retenus NPP < 0,3 0,3 0,6 0,4 0,7 1,1 1,5 0,9 1,4 1,5 2,0 2,1 2, ,9 2, >110

11 I. Principe II. Technique III. Lecture - choix de la dilution : Détermination du NPP : regroupement choisi = 321 et dans la table de Mac Grady le NPP correspondant à 321 est Calcul :


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