La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

Marqueur VASP : aspects méthodologiques, validation technique Pr L Camoin-Jau Pr J Sampol Laboratoire d’Hématologie INSERM EMI 0019 Hôpital de la Conception.

Présentations similaires


Présentation au sujet: "Marqueur VASP : aspects méthodologiques, validation technique Pr L Camoin-Jau Pr J Sampol Laboratoire d’Hématologie INSERM EMI 0019 Hôpital de la Conception."— Transcription de la présentation:

1 Marqueur VASP : aspects méthodologiques, validation technique Pr L Camoin-Jau Pr J Sampol Laboratoire d’Hématologie INSERM EMI 0019 Hôpital de la Conception Marseille ******* GEHT Paris 9 et 10 Octobre

2 ADP AC PGE1 AMPc PKA VASP VASP-P PP Activated IIb -IIIa complex complex Fibrinogen binding Activated Platelet Inactivated IIb-IIIa complex complex No Fibrinogen binding binding Resting Platelet Horstrup et al. Eur J Biochem 1994, 225 : 21-7

3 Platelet VASP- FCM Biocytex  Mesure de la capacité de l’ADP à inhiber la phosphorylation de VASP  Principe  Marquage de VASP-P en immunofluorescence indirecte après fixation et perméabilisation  Analyse en double couleur

4 Principe du test Tube 1 Tube 2Tube 3 10 µl de PGE1 10 µl sang citraté 10 µl de PGE1 +ADP 10 µl sang citraté Vortex – Incubation 10 min Fixation 10 µl Vortex – Incubation 5 min Perméabilisation cellulaire et immunomarquage 10 µl Ac anti-VASP-P 10 µlAc anti-VASP-P 10 µlContrôle isotypique 10 µl Ac anti-VASP-P 10 µl Ac anti-VASP-P 10 µl Contrôle isotypique Vortex – Incubation 5 min Révélation et contre-marquage plaquettaire 10 µl 10 µl Ig polyclonal –FITC – CD61 PE Dilution Lecture (2 h) 10 µl de PGE1 +ADP 10 µl sang citraté

5 Analyse cytométrique  Protocole compensé Positionnement de la fenêtre de la fenêtred’analyse Plaq GB Ac anti-VASP-P Condition PGE1 MFI Axe Y Ac anti-VASP-P Condition PGE1 + ADP MFI Axe Y Isotype contrôle Condition PGE1 + ADP MFI Axe Y

6 Analyse cytométrique  Protocole Non Compensé Positionnement de la fenêtre de la fenêtred’analyse Ac anti-VASP-P Condition PGE1 MFI Axe Y Ac anti-VASP-P Condition PGE1 + ADP MFI Axe Y Isotype contrôle Condition PGE1 + ADP MFI Axe Y Plaq GB

7 Calcul de l’index de réactivité des récepteurs à l’ADP MFIc PGE1 – MFI c (PGE1 + ADP) MFIc PGE1 X 100

8 Résultats préliminaires AVEC compensation SANS compensation Normaux (n=5)Plavix (n=3) Mauvais répondeurs Index de réactivité plaquettaire ns

9 Essais de répétabilité Protocole non compensé Test 1 Test 2 Test 3 Test 4 Test 5 MoyCV T T T Index de réactivité %

10 Essais de répétabilité Protocole compensé Test 1 Test 2 Test 3 Test 4 Test 5 MoyCV T T T Index de réactivité %

11 Application clinique  Mesure de la phosphorylation de VASP chez des patients traités par thiénopyridines ayant présenté ou non une thrombose artérielle sub-aiguë après ATCP avec  Groupe I (n =16): patients avec une thrombose de stent sub-aiguë sans  Groupe II (n=30) : patients sans complication thrombotique

12 Données démographiques Group SAT (n=16) Group No SAT (n=30) p Fibrinemia (g/l) 4.5   1.3 ns Platelets (G/l) 311   74 ns Duration of thienopyridines pretreatment (days) 4.4   7.4 ns Eptifibatide before (%) ns Age 66  1569  8 ns

13 Résultats 39.80% 63.30% 0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% No SAT SAT p <

14 Conclusion  Trousse aujourd’hui disponible et utilisable facilement  Indication :  suivi des traitements par thiénopyridines  Relevance clinique reste à confirmer


Télécharger ppt "Marqueur VASP : aspects méthodologiques, validation technique Pr L Camoin-Jau Pr J Sampol Laboratoire d’Hématologie INSERM EMI 0019 Hôpital de la Conception."

Présentations similaires


Annonces Google