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Procédure d'identification bactérienne Partie 1 : Préparation de la galerie miniaturisée.

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1 Procédure d'identification bactérienne Partie 1 : Préparation de la galerie miniaturisée

2 Eau distillée Tube d’eau physiologique 5mL Huile Gélose Galerie API avec boite Pipettes stériles Pipette non stérile Materials avaliable

3 1.Préparation de la suspension

4 1.1. Prélever une colonie sur la gélose avec une anse stérile. Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

5 1.2. Faire une suspension avec ces bactéries. Introduire l’anse dans un tube d’eau physiologique stérile de 5 mL. Dans l’eau, frotter l’anse sur la paroi du tube, pour disperser les bactéries. Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

6 1.3. Homogénéiser le tube par rotation manuelle, puis noter « S » sur le tube. S

7 2.Préparation de la galerie API

8 2.1. Remplir le fond de la boite avec de l’eau distillée de façon à recouvrir l’ensemble des cavités. 2.2. Effectuer un mouvement de rotation du fond de boite pour bien répartir l’eau, puis aspirer l’excédent avec une pipette non stérile.

9 2.3. A l’aide d’une pince, placer la galerie dans le fond de la boite. 2.4. Poser le couvercle et identifier votre galerie : noter le numéro de votre poste sur la languette plastique du fond de boite.

10 2.Ensemencement de la galerie API

11 Introduction Test non souligné Test souligné Test encadré Exemples : Microtube Cupule

12 3.1. Ouvrir le couvercle et l’utiliser comme support pour poser la boite de galerie de façon inclinée.

13 3.2 Homogénéiser votre suspension par rotation puis prélever environ 2 mL de suspension « S » à l’aide d’une pipette stérile. S Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

14 3.3 Remplir chaque test avec la suspension en respectant les consignes suivantes :  Pour un test souligné ou non souligné (exemple : ONPG ou ADH), remplir seulement le microtube, Cupule microtube  pour un test encadré (exemple CIT), remplir le microtube et la cupule.

15 3.4 Avec une pipette stérile, ajouter de l’huile dans les cupules des 5 tests soulignés (ADH, LDC, ODC, H2S, URE). Cupule

16 3.5 Refermer le couvercle et incuber à 37°C pendant 16h minimum. Galerie API dans l’étuve

17 4.Lecture des résultats Le deuxième jour, après incubation, identifier votre bactérie (partie 2).


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