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Procédure Salmonella sellesITU et ECBU1vendredi 10 janvier 2014 ITU et ECBU 1 Salmonella dans les selles.

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1 Procédure Salmonella sellesITU et ECBU1vendredi 10 janvier 2014 ITU et ECBU 1 Salmonella dans les selles

2 Procédure Salmonella selles2vendredi 10 janvier 2014 ITU et ECBU 2 Jour 1 Les Salmonella ne sont pas détectables dans les selles immédiatement. Il faut : –Réaliser lisolement sur milieu sélectif idoine cest-à-dire mettant en évidence des colonies « suspectes » –Réaliser, pour les trouver en cas de faible concentration, un enrichissement

3 Procédure Salmonella selles3 Caractères biochimiques des Salmonella : Glucides : lactose, saccharose et salicine - H 2 S en général + Uréase - Dautres caractères sont utilisés dans les milieux chromogènes et XLD (p 167) 1. Jour 1 : isolement

4 Procédure Salmonella selles4 SS

5 Procédure Salmonella selles5 Hektoen

6 Procédure Salmonella selles6 Rambach Chromogène bleu vert ( -galactosidase) Substrat acidifiant : propylène glycol Indicateur de pH : RN

7 Procédure Salmonella selles7 Il consiste à augmenter la proportion relative des Salmonella dans un mélange pour augmenter la probabilité de trouver des colonies suspectes sur un isolement. Supposons que lon ait 1 Salmonella pour de coliformes Supposons que les Coliformes soient inhibés à 99 % Alors Au départ : 1 Salmonella pour de coliformes Après 1 génération : 1 Salmonella pour de coliformes Après 2 générations : 1 Salmonella pour de coliformes Après 3 générations : 1 Salmonella pour 100 de coliformes Après 4 générations : 1 Salmonella pour 1 de coliforme 2. Jour 1 : enrichissement

8 Procédure Salmonella selles8 On utilise donc des inhibiteurs nombreux et des molécules qui favorisent les Salmonella ou défavorisent les autres, en particulier les Coliformes. Les milieux sont : bouillon lactosé au sélénite bouillon de M ü ller Kauffman au tétrathionate et desoxycholate bouillon de Rappaport (haute concentration en magnésium et vert malachite) Il existe des techniques utilisant des Ig anti Salmonella pour fixer les Salmonella du milieu sur un support solide à partir duquel l'enrichissement est effectué.

9 Procédure Salmonella selles9 Jour 2 1. Examen des isolements : repérage des colonies suspectes, réalisation du test Uréase rapide pour éliminer de létude les bactéries Uréase + comme : ……………… On place une colonie dans un faible volume de milieu Urée Tryptophane et on incube 2 à 3 h. Lopération est répétée sur 4 autres colonies suspectes si cela est possible. lecture des UT :

10 Procédure Salmonella selles10 1. Examen des isolements : Pour les Uréase - ensemencement dune galerie (miniaturisée… comme API20E) : reprendre la totalité du UT dans 5 mL deau physiologique). Lurée ne gène pas puisque la bact é rie est ur é ase - ! Incuber. 2. À partir des enrichissements : Réaliser un isolement sur milieu sélectif de Salmonella (certains laboratoires ne le feront que si lisolement primitif na rien donné). Toutes les opérations faites ensuite sur ce milieu sont les mêmes que celles d é crites ci-dessus).

11 Procédure Salmonella selles11 Jour 3 lire la galerie, Si Salmonella est identifiée : Sérogrouper

12 Procédure Salmonella selles12vendredi 10 janvier 2014 ITU et ECBU 12 Merci de votre attention !!!! Réalisé par Jean-No ë l Joffin ao û t 2006 Au laboratoire de SAINT BRICE ! Critiques : Bilan … au tableau !


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