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ANAEROBIES STRICTES Civel / Joffin / Karczinski - Microbiologie / ABM2.

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1 ANAEROBIES STRICTES Civel / Joffin / Karczinski - Microbiologie / ABM2

2 1. Présentation

3 1.1. Définition Incapable de cultiver en présence de dioxygène atmosphérique (20%) : car il est toxique (bactéricide ou bactériostatique)

4 1. Présentation 1.2. Mise en évidence Culture sur milieux simples : VF, HL ou CTA glucosé (culture au fond des tubes), Cultures comparées sur des milieux en aérobiose et anaérobiose (GS)

5 1. Présentation 1.3. Toxicité de lO 2 En présence dOxygène, il y a formation de radicaux libres : - Péroxydes (ex : H 2 O 2 ) - Ion superoxyde : O 2.- = oxydants puissants dégradant les protéines et acides nucléïques Origine des péroxydes : métabolisme (respiration, coenzymes respiratoires …) Comment les éliminer ? Catalase, péroxydases, superoxyde dismutase

6 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes

7 La culture nécessite : - incubation en atmosphère anaérobie (absence dO 2 ) - des milieux de culture dépourvus dO 2

8 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Anaérobiose des milieux de culture : Conditionnement : - des tubes à section étroite - des milieux gélosés où l'oxygène diffuse mal - des milieux sous paraffine ou vaseline - des milieux conditionnés sous atmosphère gazeuse artificielle (azote) Régénération : Procédé de dégazage le plus simple : ébullition 30 min à 100°C 2.1. Anaérobiose

9 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Anaérobiose des milieux de culture : 2.1. Anaérobiose Incorporation de molécules réductrices dans le milieu : Ces molécules ne doivent pas être toxiques pour les micro-organismes. CYSTÉINE ou morceaux d'organes contenant de la CYSTÉINE (Cervelle, rein, foie...). La cystéine est réductrice : 2 molécules de cystéines s'unissent par un pont disulfure en libérant 2 e- : ½ O R-SH --> R-S-S-R + H 2 O 2 cystéines cystine Thioglycolate de sodium (retrouvé dans les milieux pour hémocultures) appelé aussi acide mercaptoéthanoïque de formule HS-CH 2 -COOH. On utilise aussi du glucose (pouvoir réducteur ?)

10 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Latmosphère anaérobie : Enceintes anaérobies : Jarre, sachets anaérobies (GASPACK) 2.1. Anaérobiose

11 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Latmosphère anaérobie : Enceintes anaérobies : Jarre, sachets anaérobies (GASPACK) 2.1. Anaérobiose Principe : Ils fournissent une atmosphère appauvrie en O 2 et enrichie en CO 2. - Lanaérobiose est réalisée par réduction de l O 2 par de lhydrogène en présence de palladium Pd : H 2 + ½ O 2 --> H 2 O - La génération de l'hydrogène est obtenue par réaction d'ions H + de l'acide citrique sur des ions hydrure : H - + H + --> H 2 - Les ions hydrures sont obtenus à partir du borohydrure de sodium mis en milieu aqueux : BH 4 - Na+ --> BH 3 + H - + Na+ - En règle générale, un dégagement de dioxyde de carbone est réalisé en même temps car il favorise la culture de ces bactéries. Par laction de lacide citrique sur de lhydrogénocarbonate : H + + HCO 3 - à CO 2 + H 2 O

12 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Latmosphère anaérobie : 2.1. Anaérobiose Les systèmes commercialisés comme GasPack®, sont formés d'un sachet contenant 2 comprimés contenant : - 1 fournissant lhydrogène : le borohydrure de sodium et de l'acide citrique : BH 4 - Na+ à H - R-COOH à H+ H 2 + ½ O 2 à H 2 O - 1 fournissant le CO 2 : contient de l'hydrogénocarbonate de sodium et de l'acide citrique (comme dans les comprimés effervescents) : HCO 3 - Na+ à HCO 3 - R-COOH à H+ CO 2 + H 2 O L'addition d'eau permet la réaction

13 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Latmosphère anaérobie : 2.1. Anaérobiose - Témoin danaérobiose : Bleu de méthylène : indicateur redox : - bleu lorsquil et oxydé par lO 2, - blanc lorsquil est réduit c.a.d. en anaérobiose. Remarques : - Système Generbag Mérieux (sachets en plastique transparent). Peu coûteux, mise sous anaérobiose rapide, observation de lisolement sans ouvrir lemballage. - Merck commercialise un système analogue à base de fer comme réducteur (qui fixe lO 2 sous forme doxyde de fer). - Generbag utilise un nouveau système sans catalyseur et sans eau (utilisé à Paul Eluard)

14 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Cas particuliers datmosphère : - atmosphère microaérophile : sachets spéciaux ou générateur dH 2 et de CO 2 sans catalyseur (réaction plus lente, qui laisse de lO 2 ) - Atmosphère à 10% de CO 2 : à la bougie ou sachet générateur de CO 2, ou étuves à CO 2 … 2.1. Anaérobiose

15 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Etat Frais : 3 méthodes - Effilure de la pipette Pasteur (bouchée à la paraffine) - État-Frais luté - État-Frais classique effectué rapide 2.2. Examen microscopique

16 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Coloration de Gram et Moeller : Orientation de lidentification : - Clostridium : grands bacilles rectangulaires sporulés - Flore de Veillon : si autre morphologie 2.2. Examen microscopique

17 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Lisolement : 2 procédés - Isolement en profondeur (séries de 6 VF pour une souche pure / 12 pour un mélange)… Ancienne technique / utilisée pour conserver les souches - Isolement en surface : sur GS frais ou GS + PV, ou mieux sur Schaedler au sang (incubé en anaérobiose) 2.3. Milieux de culture

18 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Les milieux de culture : Milieux riches + Facteurs de croissance : (hémine, vitamine K1, vitamine K… ) Ils contiennent souvent du sang (apporte la catalase)… En anaérobiose : régénération des milieux, apport de substances réductrices, atmosphère anaérobie. Milieux liquides ou solides 2.3. Milieux de culture

19 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Les milieux de culture : 2.3. Milieux de culture Bouillon ou glose VF ou VL (Viande-Levure) : pour ANS peu exigent, Clostridium Bouillon ou gélose TGY (Trypticase Glucose, Yeast) : un peu plus riche - peptones et extrait de levure - glucose - thioglycolate de sodium (réducteur) (- Agar)

20 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Les milieux de culture : 2.3. Milieux de culture Milieu de Rosenow : milieu très riche mais cher - peptones + extraits de viande - chlorure de sodium : isotonie, échanges ioniques - glucose : énergie et pouvoir réducteur - chlorhydrate de cystéine (réducteur pour le maintient de lanaérobiose) - indicateur d'Andrade (fuchsine acide : rouge si acide, vert si basique) - tampon : marbre blanc (carbonate de calcium neutralisant les ions acide : CaCO 3 à CO H + à H 2 O + CO 2 ) - morceau de cervelle (riche en cystéine, les bactéries cultivent à côté du morceau de cervelle) La lecture de ce milieu est très empirique : gaz visible par décollement du bouchon de paraffine, fermentation du glucose (virage au rouge), réduction du milieu (virage au vert et à l'incolore).

21 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Les milieux de culture : 2.3. Milieux de culture Bouillon ou gélose de Schaedler : le plus employé - peptones + extraits de viande - minéraux - glucose : énergie et pouvoir réducteur - chlorhydrate de cystéine (réducteur pour le maintient de lanaérobiose) - tampon : TRIS (neutralise les H+)7 - Hémine - vitamine K3 (- Agar) (Bouillon ou gélose Wikins Chalgren : enrichie en ménadione, hémine et levure)

22 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Les milieux de culture : 2.3. Milieux de culture Milieux sélectifs : GS + Kanamycine + Vancomycine (Bacteroïdes et autres Gram –) GS + ANC : bG+ non sporulés et CG+ Gélose TSC (Tryptone Sulfite Cyclosérine) : Clostridium Tryptones, Citrate de fer, disulfite, cyclosérine (ATB), agar, eau Gélose de Willis : Clostridium (visualisation de la lécithinase) Columbia, lactose, rouge neutre, jaune dœuf… On peut aussi sélectionner les spores par chauffage à 80°C, 10 minutes.

23 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Milieux classiques pour lidentification : 2.4. Techniques didentification Type respiratoire : VF (ou 2 Schaedler différemment incubées) Bouillon nitrate Millieu au sulfite Indole (en bouillon VL ) Type respiratoire Culture en aérobiose Culture en anaérobiose AS+- AAF++ AnS-+

24 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Microgalerie : 2.4. Techniques didentification API 20 A Très proche de la galerie API 20 E (inoculation avec un bouillon Schaedler) Glucides, Uréase, Indole, esculinase, gélatinase…

25 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Microgalerie : Rapid ID 32A 2.4. Techniques didentification

26 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Microgalerie : 2.4. Techniques didentification API 32 A Ensemencement très riche 4h dincubation Recherche uniquement enzymatique (uréase, ADH, arylamidases…)

27 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Chromatographie phase gazeuse : 2.4. Techniques didentification Identification et dosage des produits de fermentation Identification et dosage des produits volatils (AG) Obtention de profils (chromatogrammes)

28 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Ex : CPG sur Clostridium difficile 2.4. Techniques didentification

29 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Antibiotype : 2.4. Techniques didentification Lantibiotypie est létude de la résistance aux inhibiteurs (antibiotiques). Cette méthode consiste à étudier la culture des anaérobies en présence de disques dinhibiteurs : - antibiotiques (Kanamycine, Penicilline, Colimycine, Erythromycine, Rifampicine, Vancomycine) - Autres molécules (biles, vert brillant) (Anaérodiscs bioMérieux)

30 2. Méthodes détude des bactéries anaérobies strictes Toxinotypie : 2.4. Techniques didentification Utilisée pour C. botulinum. Caractérisation de la toxine sécrété et identification de la souche sécrétrice.

31 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes

32 Introduction La taxonomie des anaérobies strictes n'est pas aussi évidente qu'il n'y paraît. En effet, une bactérie cultivant habituellement en aérobiose peut devenir anaérobie stricte par perte de gènes essentiels à la vie aérobie. Il n'est donc pas surprenant de trouver des Streptococcus ou des Lactobacillus anaérobies strictes ! L'habitude est de distinguer les sporulés sous la dénomination de " flore tellurique " des autres anaérobies strictes. On verra que le qualificatif de tellurique est très certainement faux.

33 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.1. Les bacilles G+ AnS : Clostridium de la flore tellurique Clostridium : bacilles, G+, AnS, sporulables. On parle de flore tellurique c'est à dire du sol. Ce ne sont pas des hôtes normaux du sol... En effet les Clostridium sont des hôtes des matières fécales et les retrouver dans le sol peut être dû à la contamination fécale bien plus qu'au saprophytisme ! Clostridium tetani

34 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : a) La bactérie : très répandu dans les intestins des animaux (porc, homme) et retrouvé dans le sol où il survit longtemps sous forme de spore. (contamination possible des fruits et légumes)

35 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : a) La bactérie : très répandu dans les intestins des animaux (porc, homme) et retrouvé dans le sol où il survit longtemps sous forme de spore. (contamination possible des fruits et légumes) b) La maladie : le botulisme BPS - Intoxination alimentaire (ingestion d'une toxine dans les aliments) - Redoutable car mortelle : la toxine bloque la transmission des PA du neurone au muscle (nv : AcétylCholine) déclenchant une paralysie flasque. trouble de l'accomodation et muscles intrinsèques de l'oeil : mydriase atteinte des muscles bucco-pharyngés (dysphagie) avec paralysie de la déglutition, difficultés d'élocution

36 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : b) La maladie : le botulisme - La toxine est thermolabile - Il existe 6 à 7 types immunologiquement différents de toxines. Conditions de la production de toxine : anaérobiose, concurrence limitée par d'autres bactéries, absence de nitrites, pH neutre à alcalin. 2 produits sont concernés : les conserves mal stérilisées et les jambons crus

37 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : Paralysie flasque

38 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : c) Méthode détude : A partir de l'aliment ou à partir d'un prélèvement du malade ou du cadavre. On peut rechercher la bactérie, mais on recherche plutôt la toxine par toxinotypie La toxinotypie est l'identification d'une toxine par des techniques immunologiques. Le principe de base est de tester une dilution du produit sur un animal en ajoutant des solutions d'Ac neutralisatrices de types différents de toxine (A à F)

39 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : c) Méthode détude : toxinotypie 1) Broyat de laliment (toxine ?) 2) Répartition en tubes : Filtrat (toxine ?) + anti A à anti F 3) Incubation 30 min, 37°C

40 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : c) Méthode détude : toxinotypie 1) Broyat de laliment (toxine ?) 2) Répartition en tubes : Filtrat (toxine ?) + anti A à anti F 3) Incubation 30 min, 37°C 4) Injections à des lots dAx 5) Bilan des survivants

41 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : Ex de résultats : 1) - Témoin mort / Témoin chauffé vivant - produit + anti-toxine A,C,D,E,F : morts - produit + anti-toxine A : vivant Conclusion : toxine botulinique de type B

42 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : Ex de résultats : 2) Témoin mort Témoin chauffé mort produit + anti-toxine A,B,C,D,E,F : morts 3) Témoin mort Témoin chauffé vivant produit + anti-toxine A,B,C,D,E,F : morts Conclusion : - toxine ou toxique thermolabile différent de la toxine botulinique OU - toxine trop concentrée (diluer le filtrat) - 2 toxines botuliniques ensemble. Conclusion : toxine ou toxique thermorésistant différent de la toxine botulinique

43 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : d) Traitement : e) Prophylaxie : Sérothérapie : Injection danticorps antitoxine (polyvalent ou monovalent) Anatoxinothérapie : injection danatoxine (pour simmuniser) - Traitement des jambon au sel nitrité (+ saumurage), - Animaux à jeun à labattage - Stérilisation industrielles contrôlée des conserves - Consommation : élimination des conserves suspectes (bombées, odeur) + cuisson importante + Guerre bactériologique : Assassinat pendant la 2 ème guerre mondiale…

44 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium botulinum et le Botulisme : Remarque : Usages thérapeutiques de la toxine botulique : La toxine botulinique (commercialisée notamment sous la marque Botox, contraction de l'anglais Botulin toxin désormais utilisée comme nom commun) traitement des maladies neurologiques comportant une trop grande activité musculaire (contractions et mouvements anormaux, crampes, spasticité, dystonie). Elle est aussi employée en cosmétique, par exemple pour réduire les rides faciales ou la transpiration excessive.

45 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium tetani et le Tetanos : (Vient de tétanisation) a) Bactérie : Bacilles Gram +, sporulables

46 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium tetani et le Tetanos : (Vient de tétanisation) 100 cas, environ, en France, chaque année BPS b) La maladie : Intoxination (succédant à une infection à C. tetani) - Infections localisées à la porte dentrée (plaies, échardes, morsures… Contaminées par de la terre ou des excréments danimaux) - Surinfections après des soins dentaires, des brulures, des opérations abdominales… - Redoutable (mortelle) - Multiplication de la bactérie au point dentrée, sécrétion de la toxine, toxine qui gagne le SNC et bloque la transmission des PA inhibiteurs : Donc, Paralysie rigide !

47 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Le tétanos est classiquement décrit sous plusieurs formes. Exemples : "Rictus sardonicus" avec paralysie faciale (à gauche). Paralysies généralisées (à droite haut), déjà peinte au 15 ème siècle. Paralysie néonatale à droite bas) Exemples de DML (souris IV) en pg ( g) botulinique ou tétanique 50 pg diphtérique pg streptolysine O pg LPS (la souris est peu sensible) pg venin de vipère pg curare pg entérotoxine de C. perfringens pg cyanure de sodium pg

48 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium tetani et le Tetanos : Il existe un seul type immunologique de la toxine. c) Méthode détude : La recherche de la bactérie est rarement pratiquée car les signes sont clairs (connus depuis Hippocrate : contractures musculaires…) d) Traitement : sérothérapie soins intensifs (des plaies / attention aux surinfections) e) Prophylaxie : vaccination par anatoxine (obligatoire en France)

49 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : a) Bactérie immobile et capsulée BPO b) La maladie : infections sous-cutanées possibles, Mais aussi la myonécrose. Le caractère très gazogène de cette bactérie et l'altération profonde des tissus provoquée ont nommé cette affection gangrène gazeuse. Un traumatisme est nécessaire : fractures, chirurgies orthopédiques ou abdominales, injections médicamenteuses (toxicomanes), maneuvres abortives. L'action de la bactérie est si puissante (enzymes, toxines...) qu'il est parfois impossible de faire quoi que ce soit... La mort survient alors en moins de 24 heures

50 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : b) La maladie : la myonécrose = gangrène gazeuse.

51 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : b) La maladie : Intoxication alimentaires Absorption dun aliment fortement contaminé par des spores C. Perfringens A : producteur dune enterotoxine Les spores germent et resporulent : Toxine produite pendant la sporulation, dans lintestin

52 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : c) Méthode détude : Clostridium perfringens produit de l'hydrogène sulfuré d'odeur caractéristique à partir des acides aminés soufrés ou à partir de substrats minéraux comme les sulfites. Il fermente le lactose.

53 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : c) Méthode détude : Tous les C. perfringens élaborent une toxine α qui est une phospholipase de type C : (lécithine diglycéride + phosphoryl choline) Le Clostridium perfringens de type A, principal agent pathogène chez l'homme, est le plus grand producteur. Cette phospholipase provoque hémolyse et lécithinase l'hémolyse peut présenter 2 zones : 1 zone d'hémolyse nette étroite et 1 zone d'hémolyse floue importante autour de la précédente.

54 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : c) Méthode détude : Culture sur : TSC : Tryptone, sulfite, cycloserine (+ Fer3) Willis : Jaune dœuf + RN

55 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium perfringens : d) Traitement : Sérothérapie : Mais la fixation rapide de la toxine dans les tissus le rend très discutable. Des Antibiotiques sont actifs sur Clostridium perfringens : béta-lactamines, métronidazole. Remarque : d'autres Clostridium donnent des maladies très similaires sinon identiques. (C. septicum)

56 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium difficile et Colites : BPO Portage sain : dans les matières fécales (>70% des nouveaux nés, 3% chez ladulte au niveau des intestins, colon et rectum...) + Chez Animaux ! - L'administration d'antibiotiques peut rompre l'équilibre de la flore intestinale et conduire au développement de Clostridium difficile. - Inflammation du colon, diarrhée aqueuse et muqueuse très abondante pouvant être mortelle (20 % des diarrhées post-antibiothérapie). + éventuellement une colite pseudomembraneuse = fausses membranes (débris cellulaires et de fibrine)

57 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium difficile et Colites : colite pseudomembraneuse Des toxines sont en cause : - toxine A : entérotoxine : nécrose des cellules épithéliales de l'intestin et hémorragies intestinales (PM = 500 kg mol -1 ) - toxine B : cytotoxine : effet cytotoxique : arrêt de multiplication cellulaire, arrondissement par destruction du réseau d'actine par l'intermédiaire de l'inactivation de la protéine rho, détachement du support. (PM = 250 kg mol -1 )

58 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium difficile et Colites : Perturbation de la flore intestinale (ex : antibiothérapie) Colonisation par C. difficile (Origine endo ou exogène) Production des toxines A + B Colite Pseudo-Membraneuse Diarrhées (agent disséminateur) Portage sain (dissémination) asymptomatique

59 + recherche par techniques, immunologiques… 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes Clostridium difficile et Colites : Diagnostic : Isolement possible mais délicat (bactérie commensale et fragile) On recherchera surtout les toxines : Test de cytotoxicité (technique de référence) : sur cellules en culture, recherche deffet cytopathogène

60 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Les bactéries :

61 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Les bactéries :

62 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Classification Bacilles gram + non sporulés bacilles réguliers ± allongés : Eubacterium, Lactobacillus bacilles corynémorphes : Bifidobacterium, Propionobacterium, Actinomyces Coques gram + Peptostreptococcus bactéries le plus souvent très proches de Streptococcus Bacilles gram négatifBacteroidaceae : Bacteroides, Fusobacterium etc Coques gram négatifsVeillonaceae SpirochètesTreponema anaérobies strictes comme T. vincentii

63 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Classification Bacilles gram + non sporulés bacilles réguliers ± allongés : Eubacterium, Lactobacillus bacilles corynémorphes : Bifidobacterium, Propionobacterium, Actinomyces Coques gram + Peptostreptococcus bactéries le plus souvent très proches de Streptococcus Bacilles gram négatifBacteroidaceae : Bacteroides, Fusobacterium etc Coques gram négatifsVeillonaceae SpirochètesTreponema anaérobies strictes comme T. vincentii

64 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Classification Bacilles gram + non sporulés bacilles réguliers ± allongés : Eubacterium, Lactobacillus bacilles corynémorphes : Bifidobacterium, Propionobacterium, Actinomyces Coques gram + Peptostreptococcus bactéries le plus souvent très proches de Streptococcus Bacilles gram négatif Bacteroidaceae : Bacteroides, Fusobacterium etc Coques gram négatifsVeillonaceae SpirochètesTreponema anaérobies strictes comme T. vincentii

65 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Classification Bacilles gram + non sporulés bacilles réguliers ± allongés : Eubacterium, Lactobacillus bacilles corynémorphes : Bifidobacterium, Propionobacterium, Actinomyces Coques gram + Peptostreptococcus bactéries le plus souvent très proches de Streptococcus Bacilles gram négatifBacteroidaceae : Bacteroides, Fusobacterium etc Coques gram négatifsVeillonaceae Spirochètes Treponema anaérobies strictes comme T. vincentii

66 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Habitat / pouvoir pathogène Non retrouvées dans le milieu extérieur. Commensales des muqueuses des animaux et de lhomme (intestin, vagin, ORL…) BPO Infections putrides polymicrobiennes (nécroses nauséabondes) Association : Ans + AS - Infections abdominales (appendicites, péritonites) : Bacteroides fragilis + Escherichia coli… - Angine de Vincent : Fusobacterium + Treponema vincentii(fuso- spirochetienne) - Infections génitales : Mobiluncus + Gardnerella… - Infections pulmonaires, buccales, septicémies…

67 Angine fuso-spirochétienne de Vincent ou Angine ulcéro-nécrotique accompagnée d'une fièvre élevée et d'une réaction ganglionnaire de voisinage. Le diagnostic est bactérioscopique avec la présence d'une bactérie de type Fusobacterium et d'une bactérie de type spirochète. Le traitement de cette angine est simple à base de pénicilline G. Examen de gorge et examen direct après coloration de Gram (X 1000)

68 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Habitat / pouvoir pathogène BPO Infections putrides polymicrobiennes Infections septicémiques monomicrobiennes Fusobacterium (suite à une angine) Bacteroides (suite à une infection abdominale) Actinomyces (suite à une infection bucco-dentaire) Peptostreptococcus (suite à un avortement) Lagent pathogène de la flore de Veillon est : Bacteroides fragilis

69 3. Les différentes bactéries anaérobies strictes 3.2. La flore de Veillon (anaérobies strictes non sporulables) Diagnostic Enrichissement : Bouillon de Schaedler Isolement sur milieux riches : Schaedler au sang frais (non sélectif), pour le rendre sélectif, on ajoute : kanamycine, vancomycine, acide nalydixique et colimycine Identification : - Type respiratoire, - API 20 A - étude de la sensibilité aux inhibiteurs (pour les Gram -)

70 groupeglucose acide butanoïque en CPG culture en présence de bile (5 mg) culture en présence de vert brillant (100 µg) pigmentation I Bacteroides du groupe fragilis fermenté-+-- II genre Prevotella fermenté---V III genre Porphyromonas non fermenté(-)--+ IV Bacteroides autres que fragilis non fermenté-V-- V genre Fusobacterium non fermenté+-+- étude de la sensibilité aux inhibiteurs (pour les Gram -)

71 Annexe : les infections dues aux AnS étude de la sensibilité aux inhibiteurs (pour les Gram -)

72 Exotoxines (Toxines Vraies)Endotoxines ou LPS Organismes producteurs Gram + et Gram -Gram - Biochimique Protéines (souvent en 2 sous-unités) LPS glycophospholipide de la membrane externe Fonctionnelle Neurotoxines, Toxines cytotoniques, Toxines cytotoxiques, Active sur le métabolisme, Détruisant les membranes… Immunotoxines Mode daction cellulaire : Activation de récepteurs. Action intracellulaire ou membranaire Action plus générale. Moins spécifique. Mécanisme actif ou passif Excrétion par les bactéries Libération à la mort des bactéries (composant la membrane externe) ToxicitéAction à faible doseAction à dose plus forte immunogénicitéSouvent forteAssez faible Transformation en anatoxines possibleimpossible Action de la températue Thermolabile (sauf entérotoxines staphylocociques) (thermostable) Annexe : Les toxines (endo et exo)

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