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Biologie du système de signalisation cellulaire induit par lhormone folliculo-stimulante (FSH). UMR 6175 INRA/CNRS/Université de Tours/Haras Nationaux,

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Présentation au sujet: "Biologie du système de signalisation cellulaire induit par lhormone folliculo-stimulante (FSH). UMR 6175 INRA/CNRS/Université de Tours/Haras Nationaux,"— Transcription de la présentation:

1 Biologie du système de signalisation cellulaire induit par lhormone folliculo-stimulante (FSH). UMR 6175 INRA/CNRS/Université de Tours/Haras Nationaux, Physiologie de la Reproduction et des Comportements, Nouzilly. Responsable Eric Reiter. INRIA Rocquencourt. Projet Contraintes, Responsable François Fages. Projet SOSSO2, Responsable Frédérique Clément. UMR 6204 CNRS/Université de Nantes. Responsable Véhary Sakanyan.

2 Daprès Rôle physiologique de la FSH. FSH granulosa Cellules de Sertoli

3 Versatilité des effets exercés par la FSH sur les cellules somatiques des gonades. follicule primaire follicule à antrum follicule pré-ovulatoire follicule primordial ATRESIE OVULATION antrum granulosa ovocyte prolifération différentiation apoptose prolifération différentiation Vie foetale birth puberté peritubular cells spermatogonia spermatocytes spermatids spermatozoa lumen Sertoli cells Basement membrane Mâle Femelle SPERMATOGENESE

4 De multiples voies de signalisation sont activées par la FSH via un RCPG. ERK p38 p70S6K AMPc PKA / PI3-K HIF-1 CREBNF1USF C/EBP NF- B Sp1 facteurs de transcription kinases SF1 Akt S6 Mâle Femelle G s FSH

5 De multiples voies de signalisation sont activées par la FSH via un RCPG. ERK p38 p70S6K AMPc PKA / PI3-K HIF-1 CREBNF1USF C/EBP NF- B Sp1 facteurs de transcription kinases SF1 Akt S6 Mâle Femelle G s FSH

6 AMPc Réponses cellulaires G s -arrestin GRK P P P P Désensibilisation R-FSH Mécanisme de désensibilisation.

7 pERK p70S6K G s /AMPc -arrestin GRK P P P P R-FSH Réponses cellulaires Désensibilisation GRK2 pERK p70S6K Signalisation GRK5/6 Signalisation dépendante des -arrestines.

8 G s /AMPc Signalisation GRK5/6 pERK p70S6K -arrestin GRK P P P P R-FSH Réponses cellulaires Désensibilisation GRK2 Signalisation dépendante des -arrestines. Gs/PKA pERK pERK p70S6K

9 G s /AMPc Signalisation GRK5/6 pERK p70S6K pERK p70S6K -arrestin GRK P P P P R-FSH Réponses cellulaires Désensibilisation GRK2 Signalisation dépendante des -arrestines. Gs/PKA pERK -arrestines pERK

10 G s /AMPc Signalisation GRK5/6 pERK p70S6K pERK p70S6K -arrestin GRK P P P P R-FSH Réponses cellulaires Désensibilisation GRK2 Signalisation dépendante des -arrestines. Gs/PKA pERK -arrestines pERK Gs/PKA pERK -arrestines pERK +

11 Objectif scientifique: mieux conceptualiser le réseau de signalisation induit par la FSH Prolifération/Différenciation Gs/PKA -arr ? ? p70S6K Erk ? ? ? Transduction Cascades de signalisation « Cross-talks » Facteurs de transcription Expression du génome R-FSH Rétro-contrôles Comparaison mâle/femelle Impact sur la gamétogenèse Codage spatio-temporel « Check-points? »

12 Mise en place dun réseau pluridisciplinaire. 2 équipes de biologistes: Mécanisme dAction des Gonadotropines (MAG), UMR6175, Nouzilly. Follicule Ovocyte et Développement, UMR6175, Nouzilly. 1 équipe de protéomique: Véhary Sakanyan, UMR6204 CNRS, Nantes. 2 équipes de modélisation: François Fages, projet Contraintes, INRIA Rocquencourt. Frédérique Clément, projet SOSSO2, INRIA Rocquencourt. ASC INRA (2 X 3ans)

13 Connaissances Expériences Mesures Modèle Mécanisme intracellulaires : interface Biocham Intégration dans un modèle multi-échelles de lovulation Cinétiques de stimulation FSH inhibitions ciblées (agents pharmaco, siRNA) Phosphorylation (puces à anticorps) AMPc,… prolifération, marqueurs de différenciation,... Modèles cellulaires : HEK293 R-FSH, cellules de Sertoli, granulosa primaires à différents stades Projet AgroBI :

14 Outils disponibles: puces à anticorps mesures des niveaux de phosphorylation à haut débit. Akt Akt1 Akt2 Akt3 ATM Bad Bax Bcl-2 EGFR ERBb2 ERK1 ERK2 FAK GSK-3a GSK-3b JNK ½ MEK 1 MEK 2 NFkB p65 P38a/SAPK P70S6K PI3K p85a PKB Kinase/PDK1 Raf/c-Raf STAT 3 Actin- Tubulin- GAPDH Rb1 S608 Akt S473 Akt T308 ATM S1981 Bad S112 EGFR Y1173 ERBb2 Y1248 ERK1/2 T202/Y204 FAK Y397 GSK-3a S21 GSK-3b S9 JNK ½ T183/Y185 MEK ½ S218/222 NFkB p65 S536 P38a/SAPK T180/Y182 PDK1 S241 PKA ST PTEN S380 Raf S259 Raf S338 STAT 3 Y705 normalisation Anti-protéines totalesAnti-phospho-protéines Plusieurs méthodes de révélation sont en phase dévaluation et de mise au point. Objectif: 100 à 200 protéines différentes. 2 types de puces:

15 CFP YFP 434 nm 528 nm FRET EPAC 1 AMPc PDE CFP YFP 434 nm 528 nm FRET AMPc Outils disponibles: senseurs fluorescents. Cinétiques de signalisation lechelle dune cellule. Paramètres mesurables: AMPc PKA PKC DAG PI3K,... Transfection/micro-injection calcium

16 Outils disponibles: knock-down cellulaires par siRNA Transfection transitoire (HEK293) Lentivirus Micro-injection Cellules primaires

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