La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

La présentation est en train de télécharger. S'il vous plaît, attendez

ETUDE DES ALTERATIONS EPIGENETIQUES DES TUMEURS DES ENFANTS : LE CAS DES EPENDYMOMES ET DES NEUROBLASTOMES Thèse réalisée au sein de Unité INSERM U578.

Présentations similaires


Présentation au sujet: "ETUDE DES ALTERATIONS EPIGENETIQUES DES TUMEURS DES ENFANTS : LE CAS DES EPENDYMOMES ET DES NEUROBLASTOMES Thèse réalisée au sein de Unité INSERM U578."— Transcription de la présentation:

1 ETUDE DES ALTERATIONS EPIGENETIQUES DES TUMEURS DES ENFANTS : LE CAS DES EPENDYMOMES ET DES NEUROBLASTOMES Thèse réalisée au sein de Unité INSERM U578 et du Service de Pédiatrie, CHU de Grenoble

2 2/49 Exposé La cytogénétique et lépigénétique des cancers La méthylation des gènes suppresseurs de tumeur et les méthodes détude Les épendymomes de lenfant Les neuroblastomes de lenfant Conclusions et Perspectives

3 3/49 La génétique et les cancers Le cancer est une maladie génétique acquise Altération au niveau de gènes suppresseurs de tumeur (GSTs) et oncogènes Altérations inactivatrices Délétion Mutation Translocation Hypothèse de Knudson Sélection dun clone plus robuste Avantage prolifératif

4 4/49 Lépigénétique Altérations qui 1. ne changent pas la séquence de lADN 2. sont transmises au cours des divisions cellulaires 3. sont potentiellement réversibles. Deux modifications principales: 1. Acétylation et méthylation des histones 2. Méthylation de lADN

5 5/49 Définition: Laddition dun groupement méthyl au niveau du carbone 5 dune cytosine dans un dinucléotide CpG Les méthyltransférases (DNMT1, DNMT3a et DNMT3b) La méthylation de lADN N NH 2 O N C C C C C Cytosine Démethylase S-adenosylhomocysteine ADN Méthyltrasferase S-adenosylmethionine N NH 2 O N C C C C CH 3 5-mC 5-méthyl Cytosine

6 6/49 La méthylation de lADN Les dinucléotides CpG sont peu fréquents dans lADN sauf dans les « îlots »CpGs Plus grande part des « îlots » sont retrouvés dans la région promotrice des gènes La méthylation pourrait entraîner la répression de la transcription de lADN deux mécanismes possibles

7 7/49 Mécanisme 1: la région promotrice Cytosine non méthylée Cytosine méthylée Promoteur Séquence codante Facteurs de transcription

8 8/49 Mécanisme 2: lacétylation des histones Histone déacétylée Histone Histone acétylée CpG non méthylée CpG méthylée

9 9/49 Méthylation et les processus physiologiques Rôle important dans lembryogenèse 4-6% de toutes les cytosines sont méthylées chez ladulte Fonction normale comme Inactivation des rétrotransposons Inactivation du X Empreinte parentale

10 10/49 Méthylation et carcinogenèse Hypométhylation globale Inactivation des gènes suppresseurs de tumeur par hyperméthylation Nombreuses études dans les tumeurs de ladulte

11 11/49 Intérêts de la méthylation Compréhension des mécanismes du développement tumoral Cible thérapeutique Utilisation comme marqueur diagnostique et pronostique (suivi clinique)

12 12/49 Le profil de méthylation Le gène ne doit pas être méthylé dans le tissu normal Un type histologique donné ne peut pas être caractérisé par la méthylation dun seul gène Établissement difficile dun profil spécifique dune tumeur

13 Cancers de lenfant et épigénétique

14 14/49 Les cancers de lenfant Rares Morbidité et mortalité élevées Caractéristiques particulières Histologie différente Comportement souvent très agressif Souvent bonne réponse au traitement Maladie du développement Altérations épigénétiques moins étudiées

15 15/49 Epigénétique et tumeur solide de lenfant

16 16/49 Epigénétique et tumeurs solides de lenfant 1. Rétinoblastome Rb1: rétinoblastomes unilateraux et sporadiques Zeschnigk et al., J Med Genet. 36:793-4, Ostéosarcome RASSF1A, TIMP3, MGMT, DAPK, p16: 93% Hou et al, Cancer 106 :1602-9, 2006.

17 17/49 Méthode détude: les gènes étudiés 19 gènes suppresseurs de tumeur : Gènes impliqués dans le cycle cellulaire (Rb1, p14 ARF, p15 INK4b, p16 INK4a ) Gènes impliqués dans lapoptose (RASSF1A, DAPK, CASP8, DRC1, DRC2, FLIP) Gènes de la réparation de lADN (MGMT) Gènes impliqués dans langiogenèse, adhésion cellulaire et le remodelage tissulaire (APC, ECAD, TIMP3) Autres (RAR, FHIT, BLU, INI1, NF2)

18 18/49 Méthode détude: les gènes étudiés DAPKMGMT INI1 NF2 EP300 APC RB BLU FHIT P16

19 19/49 Méthode détude « Methylation specific PCR » (MSP) réalisée en deux étapes: 1. Traitement avec le bisulfite de sodium 2. PCR avec des amorces spécifiques

20 20/49 Le traitement bisulfite Échantillon dADN: 5-CATGCGGTCGACGT-3 ADN modifié: Echantillon non méthylé: 5-UATGUGGTUGAUGT- 3 Echantillon méthylé: 5-UATGCGGTCGACGT- 3 MMM Traitement Bisulfite: Toutes les cytosines non méthylées sont transformées en uraciles.

21 21/49 Methylation-specific PCR Echantillon non méthylé: 5-UATGUGGTUGAUGT- 3 MSP avec les amorces Non methylé (U) et methylé (M) Amorce U: 3- ATACACCAACTACA-5 Echantillon méthylé: 5-UATGCGGTCGACGT- 3 Amorce M: 3-ATACGCCAGCTGCA-5

22 22/49 Methylation-Specific PCR Avantages: Sensible Facile Inconvénient: Non quantitative

23 Méthylation et épendymomes

24 24/49 Les épendymomes Troisième tumeur du SNC chez les enfants Pas de marqueur biologique connu Facteurs pronostiques: âge et résection chirurgicale Pas de réponse à la radiothérapie et à la chimiothérapie

25 25/49 Ependymomes et cytogénétique Perte du chromosome 22q dans 23% des cas Perte du chromosome 6q dans 15% des cas Gain du 1q (20%) et altération du 17p (rare) Mais 40% des ependymomes nont pas danomalie chromosomique Pas dassociation avec survie ou réponse au traitement

26 26/49 Nos hypothèses Méthylation comme mécanisme dinactivation des gènes localisés dans le bras long du chromosome 22 (INI1, NF2, TIMP3, EP300) Profil épigénétique particulier Relation entre la méthylation et la survie

27 27/49 Matériel 27 épendymomes intracrâniens 7 papillomes du plexus choroïde 3 cortex adultes

28 28/49 Résultats

29 29/49 Résultats

30 30/49 Résultats

31 31/49 Discussion Peu détudes réalisées Différents gènes étudiés Possibilité dune relation avec lâge du patient et la localisation tumorale Enfant adultes Intra-crâniennes rachidiennes

32 32/49 Discussion Les voies de lapoptose Utilisation possible: le diagnostic différentiel la détection précoce dune rechute Autres gènes à étudier

33 Méthylation et neuroblastome

34 34/49 Les neuroblastomes Le neuroblastome est la tumeur extra crânienne solide la plus fréquente chez les enfants de moins de 5 ans La présentation clinique est très variable: de la régression spontanée à lévolution métastatique rapide

35 35/49 Cytogénétique La ploïdie Lamplification de NMYC La délétion du chromosome 1p et du 11q La trisomie du chromosome 17q

36 36/49 Classification des neuroblastomes

37 37/49 Nos hypothèses Méthylation : mécanisme doncogenèse dans les neuroblastomes Profil de méthylation caractéristique des neuroblastomes Profil particulier en fonction des différents stades cliniques

38 38/49 Matériel 45 tumeurs primitives 17 rechutes

39 39/49 Résultats

40 40/49 Résultats Stade Nombre de patients (%) Ampl NMYC Nombre moyen de gènes méthylés CASP8BLU 1 2 4s 7 (15) 12 (27.5) 3 (7.5) 1/ /223/ (12.5) 17 (37.5) 10/ /2311/23

41 41/49 Résultats

42 42/49 Résultats METHYLATION OF TUMOR SUPPRESSOR GENES IN NEUROBLASTOMA: THE RASSF1A GENE IS ALMOST ALWAYS METHYLATED IN PRIMARY TUMORS. Pediatric Blood and Cancer En cours de soumission après revision du manuscrite.

43 43/49 Discussion CASP8 La méthylation inhibe lexpression du gène dans des lignées cellulaires Teitz et al., Nat Med 6:529–35, La voie TRAIL Différence de profil de méthylation entre les ganglioneuromes et les neuroblastomes Rétablissement de ces gènes après traitement avec des agents déméthylants Banelli et al., Cancer Lett 228:37-41, RASSF1 Méthylé dans 100% des lignées cellulaires Corrélation avec la méthylation de CASP8 Possibilité dun sous-type de neuroblastome Yang et al., Clin Cancer Res 10: , 2004.

44 Conclusions et Perspectives

45 45/49 Conclusions Étude de la méthylation de lADN dans les épendymomes et les neuroblastomes Suggestion dun profil spécifique Dans le cas des épendymomes: Altération épigénétique dans les voies dapoptose présente dans les tumeurs bénignes (papillome du plexus choroïde) Dans le cas des neuroblastomes: Altérations liées au stade clinique dans les neuroblastomes Possibilité dune relation avec lévolution tumorale

46 46/49 Perspectives Plus grand nombre de tumeurs Autres tumeurs Application de méthodes quantitatives ADN dans le sang et le liquide céphalorachidien Collaboration avec dautres centres et comparaison avec les données cliniques et génétiques

47 47/49 Perspectives Méthylation comme marqueur diagnostique et/ou pronostique Utilisation thérapeutique agents déméthylants association de la méthylation et la résistance au traitement

48 Remerciements

49 49/49 Remerciements Les directeurs de thèse: Mr Plantaz et Mme Favrot Les rapporteurs: Mr Chastagner et Mr Dellatre Mlle Florence de Fraipont Le gouvernement du Brésil (CNPq) Ministère de la Science Les techniciennes du laboratoire et lUF Cancérologie et Biothérapie Le Service de Pédiatrie du CHU de Grenoble

50 LES QUESTIONS

51 51/49 TUMEUR CEREBRALES

52 52/49 LEUCEMIES Chez les adultes les méthylations plus fréquentes : p15INK4B et p16INK4A dans les LAL et LAM. Chez lenfant: Beaucoup moins détudes Méthylation de p15 dans moins de 50% des LAL Méthylation de p16 mest pas très important Réarrangement MLL lié aux LALs du jeune enfant et caractérisé par lhyperméthylation et non trascription de FHIT

53 53/49 MÉTHODES QUANTITATIVES

54 54/49 PUCES À ADN

55 55/49 Discussion Rousseau et al.(2003) Neuropathology and Applied Neurobiology 29: 574–583 p16p15

56 56/49 CpGs methylées Methyl binding proteins Groupe Acétyl HMT Groupe Methyl La méthylation et la chromatine

57 57/49 Agents déméthylants

58 58/49 Agents déméthylants Réactivation des gènes hyperméthylés par ces composants in vitro Résultats cliniquement significatifs dans les myélodysplasies, leucémies aigues myéloïdes (LAM) et leucémies myéloïdes chroniques (LMC)


Télécharger ppt "ETUDE DES ALTERATIONS EPIGENETIQUES DES TUMEURS DES ENFANTS : LE CAS DES EPENDYMOMES ET DES NEUROBLASTOMES Thèse réalisée au sein de Unité INSERM U578."

Présentations similaires


Annonces Google