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Étapes … Exposition Toxico-cinétique Toxico-dynamique.

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1 Étapes … Exposition Toxico-cinétique Toxico-dynamique

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3 Cycle cellulaire/ Génotoxicité Atteintes à la membrane Stress oxydant Epigénétique Métabolisation Santé mitochondriale Apoptose / Nécrose Cytosquelette s Prolifération Mécanismes de cytotoxicité Mécanismes de cytotoxicité Signalisation Cellulaire

4 Étude de la Génotoxicité

5 Developed by Bruce Ames and his colleagues in the 1970s. Tests the mutagenicity of different compounds Is used by FDA to test many chemical rapidly and inexpensively Uses special bacteria that are very sensitive to many mutagenic agents Test de Mutagenèse : Test Ames (1)

6 Characteristics of mutants strains of S.typhimurium used for Ames Test cannot synthesize histidine. are very susceptible to additional mutations because they lack the normal repair mechanisms found in bacteria. more permeable than wild-type bacteria to external chemicals, including potential mutagens.

7 Different mutant strains of S.typhimurium with different mutations in their DNA TA 1535 has a base substitution that produces a missense mutation in the gene coding for the first enzyme of histidine synthesis. The mutant enzyme has a proline where a leucine is in the wild-type enzyme. TA 100 is very similar to 1535, but is also supposed to detect a different range of mutagens. TA 1537 has a frameshift mutation (deletion of one nucleotide) in a different gene than is mutated in TA 1538 has a different frameshift mutation (insertion of one nucleotide) in the same gene that is mutated in TA TA 98 is similar to 1538 but is supposed to detect more mutagens than 1538 does. TA 102 is significantly different from the others. It has an ochre mutation which means that it has a nonsense mutation. This mutation occurs in the same gene as is mutated in the strain TA 1535.

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9 Test de Mutagenèse : Test Ames (2)

10 Mise en évidence de la fragmentation de lADN sur gel dagarose

11 Fragments chromosomiques ou isolement de chromosomes entiers Migration anormale pendant la mitose Pas dincorporation dans les noyaux des cellules filles Condensation + MembraneMicronoyaux Visualisation par coloration spécifique et appréciation de leur taux comparé au taux de base Substance génotoxique ADN Induction de micro-noyaux

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15 Vit E prévient la production de micronoyaux Prévention partielle quelle que soit la concentration en Zen

16 Fusions centriques Cassures Test dAberrations Chromosomiques

17 AnneauxLacunes (Gap)

18 Induction daberrations chromosomiques Mutation Research, 365, (2005)

19 Single Cell Gel Electrophoresis (SCGE) : Technique délectrophorèse qui permet la détection de cassures de lADN (différents types de dommages) sur des cellules individualisées Test de Comète (SCGE)

20 Préparartion des lames : Inclusion des cellules dans de lagarose sur lames de microscope Lyse: Triton X-100, 2.5 M NaCl Nucleide; ADN compact Déroulement de lADN : pH alcalin Electrophorèse: pH> 13 Neutralisation Coloration de lADN Microscopie à Fluorescence Analyse (100 comètes) % ADN dans la queue est liée à la fréquence des cassures Cellule individualisée La Comète Nucleoid; ADN relaché Les boucles dADN cassé migrent vers lanode formant la queue de la comète

21 Noyau non endommagé Noyau légèrement endommagé Noyau endommagéNoyau fortement endommagé

22 Longueur Analayse dimage par ordinateur % ADN dans la queue (% ADN migrant) Moment (ADN migrant x Longueur)

23 Classe 0 Classe 4 Classe 3 Classe 1 Classe 2

24 W. Hassen & H. Bacha / 2ème Colloque Euro-Méditerranéen Nov DNA damage (Arbitrary units score)


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