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Milieu Clark et Lubs. Type de milieu Cest un milieu liquide qui permet lidentification des entérobactéries par létude du métabolisme glucidique. On réalise.

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1 Milieu Clark et Lubs

2 Type de milieu Cest un milieu liquide qui permet lidentification des entérobactéries par létude du métabolisme glucidique. On réalise deux tests : Test Vosges-Proskauer (test VP) Test du Rouge de Méthyle (test RM)

3 Test de Vosges-Ptroskauer (VP) Il permet de détecter la production dacétoïne, de dyacétyl et de butane-diol à partir de la fermentation du glucose. Le réactif ajouté (lalpha naphtol) permet dans le cas dun milieu basique et en présence de dioxygène, dobtenir une coloration rosé ou rouge acétoïne dyacétyl+ KOH + alpha naphtol + 0 ² coloration rosé ou rouge butane-diol

4 Test du Rouge de Méthyle (RM) Il permet de détecter la production dacides plus ou moins forts et plus ou moins volatiles au cours de la fermentation. Sont ajoutées au milieu quelques gouttes dun indicateur coloré de pH : le rouge de méthyle (rouge en milieu acide et jaune en milieu basique). si les bactéries produisent des acides forts au cours de la fermentation. Le milieu reste acide et donc en rouge. si les bactéries produisent des acides faibles le milieu sest acidifié, puis ré- alcalinisé. Le milieu est donc jaune.

5 Composition Clark et Lubs : peptone5,0 g k2PO45,0 g glucose5,0 g pH7,5 Réactif : VP : alpha naphtol60 g éthanol à 60%1 L RM : Rouge de méthyle 5,0 g éthanol à 60%1 L KOH ou NaOH :4 mol/L en solution aqueuse

6 Ensemencement et lecture 3 gouttes de KOH ou NaOH + 5 gouttes de VP Et lecture au bout de 10 minutes 2-3 gouttes de RM Agitation et lecture immédiate

7 Interprétation Milieu rouge =>présence dacide fort =>acidification =>test du RM positif Milieu jaune =>absence dacide fort =>pas dacidification =>test du RM négatif Milieu rouge =>présence dacétoïne et/ou de dyacétyl et/ou de butane-diol =>test du VP positif Milieu jaune =>absence dacétoïne et de dyacétyl et de butane-diol =>test du VP négatif


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