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Épiblaste: couche externe du blastoderme Ectoderme neural (dorsal) Epiderme (ventral) Gastrulation: blastoderme commence à couvrir le vitellus Contexte.

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2 Épiblaste: couche externe du blastoderme Ectoderme neural (dorsal) Epiderme (ventral) Gastrulation: blastoderme commence à couvrir le vitellus Contexte de larticle: Voies - Wnt canonique - PCP (Wnt non canonique)

3 Microscopie confocale

4 Comment la division est-elle orientée dans les différentes couches de lépiblaste? Orientation AV dans toutes les couches

5 Expérience de double marquage (H2B-GFP + RFP) Selon la règle dHertwig, le fuseau a tendance à saligner avec la longueur de la cellule (contraintes géométriques) Détermination du lien entre lorientation de la cellule et laxe de la division Division orthogonale à laxe délongation de la cellule (opposé à la règle dHertwig)

6 Le fuseau mitotique est activement orienté dans lépiblaste dorsal. Quels sont les mécanismes moléculaires/les molécules impliqués?

7 Evaluer la fonction de Dsh Utilisation de Xdd1 (forme mutante de Dsh qui bloque lélongation de laxe) Xdd1 perturbe lalignement AV dans toutes les couches de lépiblaste Les cellules se divisent avec une orientation du fuseau aléatoire (0 – 90°)

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9 Xdd1 perturbe aussi la polarité de lélongation de ces cellules Les cellules se divisent selon des angles aléatoires plutôt que perpendiculairement à laxe de leur longueur.

10 Xdd1 agit sur la convergence et lextension du tissu dorsal À lissue de la gastrulation, lembryon exprimant Xdd1 (b) a un axe AV plus court que le contrôle (a).

11 Utilisation de clones mosaïques de cellules exprimant Xdd1 dans un contexte wt: La morphogenèse a lieu normalement Les cellules exprimant Xdd1 ont une orientation de division aléatoire (avec une distribution comparable aux embryons Xdd1) Xdd1 agit directement au niveau de la cellule

12 Voies Wnt canoniques et non canoniques (PCP) Dsh appartient aux 2 voies Voie PCPVoie Wnt On cherche à distinguer ces 2 voies: Utilisation de constructions Dsh:

13 Résultats obtenus avec les différentes constructions: Inhibe PCP mais pas Wnt canonique Bloque les 2 voies Orientation de la division est aléatoire dans avec les 2 constructions Dsh contrôle lorientation de la division dans lépiblaste dorsal indépendamment de la voie Wnt canonique

14 Blocage fonctionnel de la voie Wnt Utilisation dantagonistes spécifiques: Dickkopf-1 (Dkk1): antagoniste de LRP5/6 ICAT : inhibe la β-caténine Embryons Dsh (constructions Dsh) somites avec une expansion médiolatérale Embryons Dkk1 phénotype différent, somites diminuées et tête élargie Effet de Dsh différent de celui de Dkk1

15 Dkk1 naffecte pas lalignement AV des divisions résultats idem avec ICAT (utilisation de clones mosaïques) La voie Wnt non canonique est donc bien impliquée dans la régulation de la division pendant la gastrulation.

16 PCP régule-t-il la division cellulaire orientée chez le poisson zèbre? time lapse in vivo de Slb/Wnt11 mutants perte de fonction Δslb : polarité moins prononcée Suggère la présence de facteurs additionnels

17 Quel est le rôle de Stbm (strabismus)? Injection de morpholino Stbm divisions mitotiques ne sont plus alignées Rôle important de Stbm dans lorientation de la division

18 - Lien entre orientation de la division et lélongation de laxe - Altération de la division orientée et de lélongation de laxe après inhibition de PCP Embryons Xdd1 : ont un axe plus court division provoque un élargissement moindre

19 Conclusion La division orientée participe de façon significative à lextension de la gastrula - La division des cellules de lépiblaste dorsal est orientée le long de laxe AV - Les cellules se divisent perpendiculairement à leur sens délongation - Le fuseau mitotique est activement orienté dans lépiblaste dorsal - Cest la voie PCP qui est impliquée - Strabismus (Stbm) agit sur la division cellulaire orientée Hypothèse: La division cellulaire orientée et lintercalation collaborent à lélongation de laxe, les 2 mécanismes étant régulés par PCP


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