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1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A.

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1 1 Epithélium olfactif Bulbe olfactif Cortex orbitofrontal Tractus olfactif latéral Cortex olfactif Organisation générale du système olfactif (Daprès A. Holley) Neurone sensoriel Cellule mitrale Epithélium Olfactif Bulbe Olfactif Système nerveux périphérique Système nerveux central Vers les centres olfactifs secondaires 1. PRESENTATION DU MODELE

2 2 Le bulbe olfactif (BO) Paléocortex laminaire Cellules relais: cellules mitrales 2 niveaux de modulation de lactivité des cellules mitrales –Cellules périglomérulaires (CGl) –Cellules granulaires (CGr) Organisation anatomique et synaptique du bulbe olfactif BO Couche du nerf olfactif Couche glomérulaire Couche plexiforme externe Couche des cellules mitrales Couche plexiforme interne Couche granulaire

3 3 Neurogenèse bulbaire: Prolifération, Migration, Différentiation: de la ZSV au BO Corps Calleux Néocortex Cervelet BO Ventricule Latéral Flux rostral migratoire Gl Gr ZSV ZSV: Zone sous ventriculaire Gl: couche glomérulaire Gr: couche granulaire ZSV Deux couches du bulbe olfactif concernées par la neurogenèse: -la couche glomérulaire - la couche granulaire A Observer: coupes histologiques colorées en Crésyl Violet du bulbe olfactif

4 4 CC NC CV BO VL Localisation de la zone sous ventriculaire Ventricule Latéral A observer: marquage BrdU dans la zone sous ventriculaire, Lames 27 AV

5 5 Evaluation de neurogenèse dans le bulbe olfactif par la méthode de la BrdU Injection du marqueur de prolifération 6 heures 6 jours 12 jours et plus Prolifération Migration Différenciation Survie Cellules BrdU-positive dans la couche granulaire du BO 2.MESURE DE LA NEUROGENESE: METHODES

6 6 Coupe 1 Coupe 2 Coupe 3 ANIMAL 10 Méthode de comptage des cellules marquées par la BrdU Elaboration dune maquette à partir des coupes histologiques

7 et 5: couche glomérulaire 2 et 6: couche plexiforme externe 3 et 7: couche granulaire 4 et 8: Zone sous ventriculaire Sur certaines maquettes, toutes les couches nont pas été tracées

8 8 3.1 Evaluation de la survie à long terme des cellules néoformées dans le bulbe olfactif et rôle des entrées sensorielles: principe de lexpérience jours post BrdU Occ unilatérale BrdU 3. EXPERIENCES ET OBSERVATIONS Vérification de lefficacité de locclusion de la narine par immunocytochimie de la Tyrosine Hydroxylase, enzyme de synthèse de la dopamine, qui ne sexprime plus dans le bulbe olfactif en absence dentrées sensorielles. contrôle occlus Observer -coupes histologiques portant révélation immunocytochmique du BrdU -maquettes correspondantes pour une série danimaux sacrifiés à différents temps après ladministration de BrdU: 10 et 27: 15 jours 65et 72: 45 jours 48: 6 mois Utiliser les tableaux fournis qui indiquent pour chaque maquette le nombre de cellules comptées et la surface de la couche granulaire pour calculer la densité de cellules marquées et tracer la courbe de survie des cellules. Les régions grisées correspondent au côté du bulbe olfactif qui a été privé dinformation sensorielle.

9 9 Evaluation de la survie à long terme des cellules néoformées dans le bulbe olfactif et rôle des entrées sensorielles Durée de vie limitée de la majorité des neurones néoformés Existence dune période critique pendant laquelle la survie des cellules néoformées est sensible à lentrée sensorielle contrôles obturés Number of BrdU positive cells * *

10 10 Un Modèle murin de Maladie dAlzheimer: Tg2576 Porteuses de la mutation suédoise humaine de lAPP APP NH2 COOH A - peptide amyloïde circulant à 6 mois -Plaques séniles vers mois Chishti et al Déclin des fonctions mnésiques Chen et al Wt Tg Dysfonctionnement cholinergique Lüth et al µm 3.2 Etude de la neurogenèse dans un modèle murin de la maladie dAlzheimer Déficit en noradrénaline?

11 11 Protocole et résultats BrdU 45 jours Survie des cellules néoformées dans la couche granulaire Evaluation des capacités dapprentissage Apprentissage associatif Evaluation du système noradrénergique A observer: Vidéo de lapprentissage Lames histologiques marquées au BrdU et maquettes: S1 et S8: souris sauvages S3 et S6: souris trangéniques Lames histologique marquées par un anti corps anti-dopamine- - hydroxylase dans le Locus Coeruleus (détection des neurones noradrénergiques)

12 Enrichissement olfactif et neurogenèse J0 J40 Enrichissement olfactif J20 BrdU A observer: Animal 11 et Animal 24 avec maquettes et tableaux de résultats. Lequel a été enrichi? Contrôle

13 13 BrdU/NeuN Gl BrdU/Calbindin Double marquage des cellules BrdU-positive avec un marqueur neuronal


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