L’activation de ERK induite par EGF provoque la dissociation de l’heterodimere -caténine /-catenine et la transactivation de la -catenine via ck2

Introduction ARTICLE : -caténine/voie Wnt impliquées dans l’activité transcriptionnelle Cellules cancéreuses Activité accrue voie Wnt Quantité accrue de -caténine dans le noyau ARTICLE : Rôle d’EGF, ERK et CK2 : dissociation hétérodimère caténine et transactivation B-caténine

Voie Wnt Nucléaire : Tcf/Lef-1 activés par B-caténine Facteurs de transcription Sous membranaire : complexe E-cadhérine/a-caténine/B-caténine Dissociation par phosphorylation de a-cat

Action d’EGFR actif sur le complexe cat Dissociation du complexe ~ temps d’exposition à EGF

Action d’EGFR actif sur le complexe cat EGF : Dissociation du complexe a-cat/b-cat Membrane: diminution de b-cat Cytosol : augmentation de a-cat Noyau : augmentation de b-cat

Action d’EGFR actif sur le complexe cat Traitement EGF 24 h : B-cat : accumulation nucléaire A-cat : présence membranaire et cytoplasmique Absence de colocalisation a-cat/b-cat

Action d’EGFR actif sur le complexe cat Augmentation a-cat : inhibition internalisation b-cat (après exposition EGF)

Action d’EGFR actif sur le complexe cat EGF augmente l’activité transcriptionnelle de TCF/Lef-1 En présence d’a-cat, activitié transcriptionnelle moindre

Action d’EGFR actif sur le complexe cat shRNA : déplétion en a-cat Contrôle : activité transcriptionnelle élevée en présence d’EGF A-cat shRNA : activité transcriptionnelle forte en présence et en absence d’EGF

Action d’EGFR actif sur le complexe cat A-cat et b-cat sans stimulation par EGF : complexe sous membranaire Activation EGFR : dissociation du complexe Translocation nucléaire de b-cat Activation tcf/Lef-1 par b-cat dans le noyau

Phosphorylation de a-catenine par ck2 Après stimulation par EGF Phosphorylation sur sérine en position 641 de l’a-cat

Phosphorylation de a-catenine par ck2 (résultats in vitro) En absence de CK2 : pas d’a-cat phosphorylée En présence de CK2 : a-cat phosphorylée en position 641

Phosphorylation de a-catenine par ck2 (in vivo) Phosphorylation de a-cat WT par CK2 A-cat mutée (S641A) non phosphorylée par CK2

Phosphorylation de a-catenine par ck2 Traitement par EGF (30 minutes) Augmentation de la quantité d’a-cat phosphorylée aux niveaux membranaire et nucléaire

Phosphorylation de a-catenine par ck2 Traitement par EGF Interaction FLAG-WT a-cat/CK2 ~ temps d’exposition à EGF

Phosphorylation de a-catenine par ck2 Déplétion en CK2 par shRNA (non totale) Exposition à EGF : Contrôle : phosphorylation de S641 (a-cat) Cellules shRNA CK2 : pas de phosphorylation

Phosphorylation de a-catenine par ck2 EGF induit la phosphorylation de a-cat en S641 par activation de CK2

La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat Ajout de CK2 provoque la dissociation du complexe a-cat (WT)/b-cat Dissociation du complexe, quelle que soit la quantité d’a-cat A-cat mutée : pas de dissociation par CK2

La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat Inactivation de CK2 : augmentation de la liaison a-cat/b-cat

La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat Déplétion de CK2 par shRNA et action de EGF Pas de dissociation de l’hétérodimère

La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat Cellules transfectées avec a-cat WT, S641A ou S641D/pas d’exposition à EGF S641A : liaison a-cat/b-cat augmentée S641D : liaison a-cat/b-cat moindre Idem aux niveaux membranaire et nucléaire

La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat