Journées Scientifiques Internationales de Lomé (JSIL-2016) du 03 au 08 octobre 2016 Evaluation de la toxicité aigüe de la feuille de Hemizigia bracteosa (Benth) utilisée en médecine traditionnelle dans le traitement de l’hyperglycémie au Bénin Merci le Monsieur le président du Jury. Excéllence monsieur le Président du jury cette thèse qui a été effectuée sous l’autorité scientifique de Dr Edwige AHOUSSI- DAHOUENON est intitulé: Pratiques endogènes de production et efficacité d’extraits de plantes aromatiques dans la stabilisation du " tchakpalo ", une bière de sorgho, au Bénin N. W. CHABI, C. T. R. KONFO, M ADJAGBA, L. MOUSSEDIKOU, E. AHOUSSI-DAHOUENON, A. LALEYE, C. GBAGUIDI, M. M. SOUMANOU

II- Matériel et méthodes III- Résultats et discussion PLAN I- Introduction II- Matériel et méthodes III- Résultats et discussion IV- Conclusion et perspectives Notre exposé sera présentée en 4 parties. Après une introduction qui pose la problématique ainsi que les objectifs de la thèse, nous présenterons le cadre du travail, le matériel et la méthodologie adoptée. Nous présenterons ensuite les résultats structuré en 5 chapitres avant de conclure et de suggérer des perspectives.

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 INTRODUCTION Le Sorgho est une importante céréale ancestrale des régions sub-sahariennes. Il est utilisé aux Etats-Unis pour l’alimentation du bétail et la production du bioéthanol. C’est une céréale présentant un intérêt industriel, recherché pour ces propriétés antioxydantes et anti-inflamatoire. Au Bénin, le sorgho est utilisé pour la production d’une bière locale dénommée tchakpalo

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 L’utilisation des plantes médicinales pour le traitement des maladies est à la fois la plus ancienne et la plus moderne des moyens thérapeutiques qui soient. Leur usage a été longtemps pratiqué par les hommes Environ 35000 espèces de plantes sont employées dans le monde à des fins médicinales, ce qui constitue le plus important éventail de biodiversité utilisée par les êtres humains Il y a plus de 20 ans déjà que l’OMS reconnut l’importance de la médecine traditionnelle En 2000, l’OMS estime que 80% des habitants du monde se fondent principalement sur la phytothérapie (Holm et al. 1998; Kokwaro, 1993; Elqaj et al., 2007; Flahaut, 2002). L’utilisation des plantes médicinales pour le traitement des maladies ou la phytothérapie est à la fois la plus ancienne et la plus moderne des thérapeutiques qui soit. Les plantes médicinales ont une longue histoire dans le traitement des différents types de maladies (Holm et al. 1998). Leur usage a été longtemps pratiqué par les hommes et continue d’être pratiqué aujourd’hui (Kokwaro, 1993). Environ 35000 espèces de plantes sont employées dans le monde à des fins médicinales, ce qui constitue le plus important éventail de biodiversité utilisé par les êtres humains (M. Elqaj et al., 2007) Il y a plus de 20 ans déjà que l’OMS reconnaissait l’importance de la médecine traditionnelle et proposait son intégration dans les systèmes officiels de santé, particulièrement dans les pays en développement (Flahaut, 2002). En 2000, L’OMS estime que 80% des habitants du monde se fondent principalement sur cette médecine pour leur besoins primaires de santé. Les plantes médicinales continuent de répondre à un besoin important malgré l’influence croissante du système sanitaire moderne. Actuellement, le marché global des plantes médicinales est estimé à près de 62 milliard de dollars et la demande continue de croître (Indian Council of Medical Research, 2003).

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Les plantes médicinales ont été utilisées traditionnellement pour traiter plusieurs maladies telles que le diabète et certaines maladies cardiovasculaires . Le diabète, la 6è cause de décès des pays sous-développés, est une anomalie du métabolisme des sucres ( Maiti et al., 2004 ). Cette maladie pose aujourd’hui un véritable problème de santé. En effet, la prévalence mondiale du diabète pour tous les groupes d’âge était estimée à 2,8% (Sarah W, et al., 2004). Le coût élevé et l’inaccessibilité des médicaments amènent les malades à l’utilisation de ces plantes.

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Ces plantes soulagent certes les malades, mais les doses thérapeutiques et la toxicité ne sont pas déterminées. C’est le cas de Hemizygia bracteosa (Benth) (Cantino et al. 1992, Paton 1998, Paton et al.2004). Hemizygia bracteosa (Benth) a été initialement reconnu comme faisant partie des Ocimum par Bentham (1848), A cause de ses vertus thérapeutiques, Hemizygia bracteosa (Benth) commence par être utilisée dans le traitement de certaines maladies cardiovasculaires et le diabète au Bénin. Mais son utilisation comme agent thérapeutique dans le traitement de ces maladies est basée sur des expériences endogènes et n’est soutenue d’aucun fondement scientifique. Cette étude se propose d’évaluer son efficacité dans le traitement du diabète et des maladies cardiovasculaires.

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 De manière spécifique, il s’agit de: Rechercher les grands groupes des substances actives de la poudre de Hemizygia bracteosa (Benth) Evaluer l’effet de l’extrait de la poudre sur les rats Wistar à des concentrations de 100mg, 250mg par kg de poids corporel par rapport à certains paramètres biochimiques impliqués dans le diabète. Apprécier l’impact de la toxicité aigüe induite sur le foie et les reins des rats Wistar par l’extrait de la poudre à des concentrations de 2000mg et 3000mg par kg de poids corporel.

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériel et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 MATERIEL ET METHODOLOGIE

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériel et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Matériel Collecte et traitement du matériel biologique Les feuilles de Hemizygia bracteosa (Benth) récoltées à Savalou (centre Bénin) et identifiées par les spécialistes de l’Herbier National du Bénin; Photo1: plante de Hemizigia bracteosa Elles ont été séchées au laboratoire à 22°C avant de les réduire en poudre;

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériel et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Les rats Wistar ont été acclimatés aux conditions ambiantes d’élevage à l’animalerie de l’Unité d’Enseignement et de Recherche de Biologie Humaine FSS/UAC Photo 2: opération de gavage du rat Wistar

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériel et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Collecte et traitement du matériel biologique Observation microscopique et photomicrographie (marque Olympus BX-41 muni d’une caméra JVC de ½ pouce) Préparation des cassettes et fixation des tissus Circulation - Déshydratation (Alcool: 70°, 80°, 100° ( 6X) - Eclaircissement (Bain de xylène) - Imprégnation (paraffine préalablement chauffé) Enrobage Coupes au microtome (5µm) Etalement et Coloration (Hématéine-éosine) Jeûne de 12h Gavage 0,1g; 0,25g; 2g et 3g/Kg Observation (45min, 1-14 j)/30 j. Sacrifice (14ème j)/30 j Prélèvement sanguin, du foie et des reins Conservation (formol) Figure 2: Etapes d’évaluation de la toxicité de H. bracteosa pour les rats Wistar (OCDE, 2001)

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériel et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Dosage des paramètres biochimiques (kits vendus par la société ELITech Clinical Systems) Références Glycémie - Triglycérides Fassati et Principe (1982) Cholestérol Total Fasce (1982) Cholestérol HDL Protéines Henry et al. (1974)

Résultats et discussion Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Résultats et discussion

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Tableau 2. Effet de l’extrait aqueux de H. bracteosa sur les paramètres biochimiques des rats Echantillons Paramètres Controls 100mg/Kg of weight 250/Kg of weight Day 0 Day30 Day0 Blood sugar   p-v 1.42±0.25a 1.36±0.20a 1. 60±0.25a 0.98±0.24b 1.61±0.15a 0.93±0.25b 0.699 0.003 0.001 Protéines 82.84±16.13a 83.02±16.25a 95.33±20.59a 58.30±6.26b 81.19±23.57a 66.12±6.82b 0.986 0.005 Cholestérol total 1.28±0.33a 1.29±0.33a 1.06±0.40a 0.81±0.12a 0.99±0.31a 0.98±0.11a 0.994 0.223 0.946 HDL -Cholestérol 0.20±0.16a 0.27±0.15a 0.23±0.004a 0.48±0.15b 0.29±0.14a 0.43±0.09b 0.991 0.088 Triglycéride 1.10±0.43a 1.17±0.48a 1.2±0.43a 1.18±0.38a 0.90±0.26a 1.3±0.17b 0.785 0.718 0.033

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Toxicité aigüe de la feuille de H. bracteosa sur le foie V Noyau Veine centro lobulaire Travées hépatiques Figure 1: Photo du lobule hépatique de rat Wistar normal (HE X 400)  V A :2g/kg Disparition des noyau Fig 1 montrant des travées hépatiques séparées par des sinusoïdes et disposées autour d’une veine centro lobulaire (V). Bien que l’architecture hépatique soit globalement conservé à la dose de 2 g/kgPV (A), à la dose de 3 g/kg PV (B) apparaissent des signes de nécrose hépatocytaire marqués par une homogéinisation et une acidophilie du cytoplasme ainsi que la disparition des noyaux, B: 3g/kg V Figure 2: Photos de lobules hépatiques (HE X 400) de rat Wistar

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Toxicité aigüe de la feuille de H. bracteosa sur les reins Glomérule Capillaires glomérulaires Tubules rénaux Figure 3: Photo du cortex rénal de rat Wistar normal (HE X 400) A :2g/kg B: 3g/kg Nécrose: « Pain à cacheter glomérulaire » Figure 4: photo du cortex rénal de rat Wistar traité avec H. bracteosa (HE X 400)

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Très peu d'études ont été rapportées sur le H. bracteosa [Otieno et al, 2006; Konfo et al 2014]; cette plante pourrait être considérée comme une espèce négligée et sous-utilisée L'administration de la poudre de cette plante a provoqué une diminution significative (p <0,05) du glucose sanguin, des triglycérides et des protéines plasmatiques chez des souris alors qu'aucune différence significative n'a été observée chez les souris témoins. À 100 mg /Kg de poids corporel, le cholestérol HDL a été augmenté(p<0,001)et le cholestérol total a diminué. Ces résultats montrent que la plante a effectivement une activité hypoglycémiante; ce qui justifie son utilisation dans le traitement du diabète. Des travaux ultérieurs nous permettront d'identifier le mécanisme exact de l'effet hypoglycémiant [Chabane et al, 2013]

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives L'analyse phytochimique de la poudre H. bracteosa (Benth) a révélé la présence de flavonoïdes[Konfo et al,2014] qui peuvent être responsables de l'effet hypoglycémiant observé [Areej et al, 2012]. Des recherches récentes ont démontré que les glycosides flavonoïdes étaient responsables [Deutscchlander etbal, 2012] Les résultats des tests histologiques ont montré une toxicité de H. bracteosa sur les reins et le foie à toutes les concentrations testées 2 et 3 g / kg de poids corporel.

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Conclusion

Résultats et discussion Conclusion et perspectives Introduction Matériels et Méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives Chapitre 1-5 Conclusion Cette étude a: montré l’activité hypoglycémiante de l’extrait aqueux de Hemizygia bracteosa (Benth) sur les rats de laboratoire; Également démontré qu’à certaines concentrations, cette plante est toxique pour le foie et les reins; Son usage en médecine traditionnelle pour le traitement du diabète mérite donc d’être mieux rationnalisée.

MERCI DE VOTRE AIMABLE ATTENTION