Les nouveaux outils pour maitriser la mise en bouteille stérile

réduction proportionnelle Vin avec une forte population levurienne Risque de « relargage » Pollution du matériel Filtration = réduction proportionnelle de la charge

La filtration de mise si élimination de 99,9999% des levures par filtration de mise levures/ml avant filtration levures /ml levures / bouteille 100 0,0001 0,075 1000 0,001 0,75 10 000 0,01 7,5 100 000 0,1 75 1 000 000 =début de FA 1 750 Mise en bouteille stérile = levures/bouteille <10 (voir <1)

Risque de « relargage » Pollution du matériel Vin avec une forte population levurienne Analyses de la population levurienne par cytométrie de flux Analyse du SO2 moléculaire, libre et total Filtration = réduction proportionnelle de la charge Adaptation du traitement de mise Adaptation du type de filtration à la population levurienne Risque de « relargage » Pollution du matériel = Maîtrise des risques 1 vin contaminé peu mettre en cause tout le travail d’une journée Suivi microbiologique de la mise en bouteille Augmentation des risques de contamination du matériel = garantie de qualité de la mise en bouteille stérile

La cytométrie de flux Quoi ? Pourquoi ? Comment ?

La cytométrie : quoi ? 1968 2008 Partec: l’innovation en marche depuis 40 ans Principes des appareils de Cytométrie en Flux Pascal Brunou, David Bastien Partec France 6 6

Domaines d’applications (2) Agrosciences: Recherche vétérinaire Aquaculture Biologie végétale Sélection variétale Applications Industrielles: Agroalimentaire (jus de fruit, bière…) Produits cosmetiques Pharmaceutique Industrie du papier 7 7

Analogie entre microscopie et cytométrie de fluorescence Echantillon fixe sur lame au microscope Echantillon liquide focalisé sous l’objectif et le trajet optique du cytomètre Cytométrie: = « mesure des cellules »

Système fluidique - Focalisation hydrodynamique PMT 1 PMT 2 LASER Cellule de mesure = cœur du système 9

Excitation par un laser des particules injectées Source d’excitation lumineuse ultra-performante type laser pour une excitation et analyse des signaux d’émission en quelques microsecondes Forward Scatter (FSC) Laser Side Scatter (SSC) + Fluorescence 10

Différentes approches pour le marquage des cellules Sondes intra-cytoplasmiques Anticorps Sondes ADN Marqueurs de surface - organites cellulaires

Configuration simple ou multi-couleurs Système Mono-paramétrique Système Multi-paramétrique source d’excitation simple / sources multiples

La cytométrie : quoi ? Représentation des résultats en 3 dimensions : * taille-structure (FSC) / activité fermentaire de la levure (Fluorescence) * Densité de population = couleur - taille-structure (FSC) - population - Activité levurienne (fluorescence) - population

Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total 30.040 317.610 136.780 300.400 3.176.100 1.367800 4.844.300 10X Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total 2.670 29.810 11.330 267.000 2.981.000 1.133.000 4.381.000 100X Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total 330 4.580 1.620 330.000 4.580.000 1.620.000 6.530.000 1000X

Caractéristiques de la méthode Gamme de mesure : 100 à 500.000 levures/ml (sans dilution) Limite de détection : 100 à 1000 levures/ml Répétabilité : <10% de la mesure Bonne corrélation entre l’activité fermentaire de la levure et l’intensité de la fluorescence mesurée

La cytométrie de flux, un outil qui : Permet un comptage rapide et précis Permet de connaître la viabilité et l’activité fermentaire Apporte une solution efficace pour la maitrise des mises en bouteille stériles