Environnement, exposition, sensibilisation allergique : + 45 kDa Environnement, exposition, sensibilisation allergique : Etude analytique d’un modèle de pollen de cyprès en Méditerranée 1- ESPCI ParisTech, PECSA, UMR 7195 CNRS, Paris, France; 2- Unité d’Immunologie, Autoimmunité et Hypersensibilité, Hôpital Bichat-Claude Bernard, Paris, France ; 3- Center of Molecular Allergology, IDIIRCCS, Rome, Italy, 4- Hôpital Nord, Marseille, France Y Shahali; LSABM, ESPCI-ParisTech, 24 novembre 2011 1 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Allergie au pollen de Cupressacées dans le monde E Scala et coll. 2010 23,077 patients ISAC 75 allergènes Cup a 1: 43% 2 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Les risques allergiques en France Source: RNSA 2003 Source: INRA 2010 3 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Pollen de cyprès: aspects particulaires fragilité de l’exine Pollen: 20-24 µm de diamètre Orbicule: 300-600 nm de diamètre 5 µm Micrograph of an Arizonica cypress pollen Shahali et al. 2007, 2009 300 nm Orbicules 4 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Exposition expérimentale du pollen de cyprès au NO2 Etude en collaboration avec le PC2A "Physicochimie des Processus de Combustion et de l'Atmosphère", Université Lille 1. 5 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Extraction aqueuse ex cy in 6 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

1er contact antigénique Mécanisme de l’allergie et identification des allergènes 1 – évaluer le répertoire des allergènes 2- évaluer le répertoire des IgE des patients allergiques 2e contact antigénique masto ou baso 1er contact antigénique IgE du sérum, spécifiques des allergènes auxquels le patient est sensibilisé Th2 IL-4 IL-13 Be IgE Ag Ag cytokines leukotriènes PAF prostaglandines enzyme HISTAMINE Sensibilisation APC chemokines dégranulation symptômes cliniques 7 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

µg de protéine par gr de pollen méthodes d’extraction Ratio Différentes extractions des protéines du pollen 1975 *TUC 1496 SDS 150.5 PBS 91 H20 µg de protéine par gr de pollen méthodes d’extraction 1.7 10 17 21 Ratio *2 M Thiourea, 7 M Urea, 2% CHAPS 8 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Criblage en SDS-PAGE 1-D avec un extrait SDS Serums anti-HMW Serums anti-14 kDa 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 9 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Electrophorèse 2-D sur des extraits polliniques kDa Cup s 1 - 94 1 H2O 1 - 67 - 43 - 30 - 20 - 14.4 4.45 5.1 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 9.6 4.45 5.1 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 9.6 pI pI b d PG kDa Cup s 1 - 94 2 2 1 - 67 PBS 1 - 43 1 - 30 3 - 20 3 ? - 14.4 10 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Cinétique d’extraction des protéines du cyprès de Provence en PBS kDa 11 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Comparaison de la réactivité IgE aux protéines du pollen de cyprès de Provence chez les patients Italiens et Français 23.3% 60.1% 16.6% 30.5% 44.5% 25% kDa - 94 - - 67 - - 43 - - 30 - - 20.1 - - 14.4 - 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 negative HMW BP14 BP14 HMW negative 12 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Allergène de 14 kDa fortement exprimé dans le pollen de Cupressus sempervirens Cyprès d’Arizona Cyprès de Provence Ca Cs kDa 94 94 67 45 30 20.1 14.4 13 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

CONCLUSION Le pollen de cyprès est une source importante de fines particules submicroniques Optimisation de l’extrait de pollen de cyprès utilisation de détergents et d’agents chaotropiques Révélation de nouveaux allergènes Deux profils d’immunoréactivité allergènes de haute masse moléculaire allergène de 14 kDa L’importance des conditions d’exposition et de l’espèce sensibilisante L’apport de la biochimie analytique et de l’allergologie moléculaire l’étude du répertoire des allergènes L’analyse de la diversité de la réponse allergique (pollen, moisissures, acariens, aliments…) 14 Colloque FGL Strasbourg 24.02.2011

Remerciements Pascal PONCET Jean-Pierre SUTRA Iman HADDAD Gabriel PELTRE Hélène SENECHAL ESPCI ParisTech, LSABM Iman HADDAD Emmanuelle DEMEY Joëlle VINH ESPCI ParisTech, LSMBP Sylvie CHOLLET-MARTIN Pascale NICAISE INSERM U996, Paris Denis CHARPIN Hôpital Nord de Marseille Philippe CHAFEY ICGM, Paris Adriano MARI CMA, Rome, Italy Laurence GUILLOUX Biomnis, Lyon