Le clonage thérapeutique chez l’Homme : intérêts, alternatives et aspects législatifs CAUDRILLIER Jérôme CHARPENEL-NEBOUT Valérie DUROYON Céline

Introduction Naissance de Dolly en 1996 (1er clone somatique de mammifère adulte)  nouvelles perspectives scientifiques imposant des définitions précises et l’élaboration d’un cadre législatif relatif au clonage. Définitions: Clonage = technique consistant à développer une lignée de cellules à partir d’une cellule unique (définition du Robert); production asexuée à partir d’une cellule ou d’un organisme d’entités biologiques génétiquement identiques à cette cellule ou à cet organisme  2 méthodes de duplication génétique: - scission embryonnaire - transfert nucléaire: introduction dans le cytoplasme d’un ovule non fécondé dont on a retiré le matériel nucléaire, d’un noyau d’une cellule déjà différenciée (somatique adulte) Débat sur l’application à l’homme des techniques de clonage avec introduction d’une distinction entre clonage reproductif et thérapeutique : naissance d’être humain vs formation d’un être humain potentiel traité comme un moyen et pas une fin (existence éphémère et utilitaire) Cellules souches: Totipotentes = obtenues dans les 4 premiers jours de croissance de l’embryon (morula 8 cellules)  peuvent permettre le développement d’un être humain complet Pluripotentes = obtenues à partir du blastocyste (40 cellules)  tissus d’un organe Multipotentes = présentes dans l’organisme adulte  plusieurs types de cellules différenciées Unipotentes = ne donnent qu’un seul type de cellules différenciées.

Intérêts Clonage thérapeutique = formation d’un œuf humain ayant des caractéristiques identiques à celle d’un malade  gisement de tissus compatibles, et en particulier de cellules souches embryonnaires (cellules ES).  Technique utilisée : transférer le matériel génétique des cellules du patient dans un ovocyte énucléé, développement jusqu’au stade blastocyte, puis prélèvement dans la masse cellulaire interne et mise en culture des cellules pluripotentes. Intérêts majeurs = surmonter les problèmes de rejet immunitaire; obtention de cellules immunocompétentes à des fins de thérapie cellulaire. Exploitation des cellules souches pluripotentes: grandes capacités de multiplication conservation du caractère indifférencié normales du point de vue génétique, ne présentent ni mutations ni anomalies chromosomiques possibilités de différenciation en tissus divers (cellules nerveuses, sanguines, de cartilage,…)

Intérêts Intérêts immédiats pour la recherche : sujet fondamental d’étude (développement embryonnaire, cancer, recherche génomique, pharmacologie-toxicologie…) Applications thérapeutiques à plus long terme : - Thérapie cellulaire: source illimitée de tissus ou de cellules spécifiques = greffes immuno-compatibles  traitement de maladies dues à des lésions cellulaires (maladie de Parkinson, d’Alzheimer, trauma de MO, lésions cardiaques ou cérébrales, brûlures, diabète, ostéoarthrite, dystrophie musculaire…)  expérimentation récente : transplantation de cellules musculaires cardiaques (souris)  1er kit de cellules souches pour une patiente (équipe coréenne)

Intérêts - Thérapie génique Remplacement de tissus ou organes anormaux par suite de la présence d’un gène muté, chez des individus jeunes ou adultes Correction d’une anomalie génique par clonage intracouple = obtention d’une guérison définitive par la voie du clonage à partir d’ovocytes de la femme par transfert de noyaux de cellules ES, corrigés et provenant d’un blastocyste du couple Le clonage thérapeutique se heurte à des problèmes d’ordre: - éthique : être vivant créé comme moyen (statut de l’embryon) - technique - scientifique : longueur des télomères, instabilité des cellules souches embryonnaires en culture, facteurs épigénétiques…

Alternatives Applications déjà éprouvées de la thérapie cellulaire  Greffes allogéniques de cellules souches hématopoïétiques (CSH) du sang périphérique, ou de sang placentaire (sang de cordon)  Greffes de peau - autologues (biopsie d’un fragment de peau mis en culture): procédé « Epicel », culture de kératinocytes, de cellules du derme - allogreffes (urgence), xénogreffes (derme porcin) En cours d’expérimentation:  Ingénierie tissulaire = reconstruction de structures proches des tissus à partir de cellules vivantes pour des usages in vivo ou ex vivo (création de néoorganes à partir de cultures cellulaires in vitro)  Utilisation de biomatériaux (vessie bioartificielle, vsx sanguins?, cornée?...)  transplantation d’organes sans pb éthique car cellules adultes et non embryonnaires

Alternatives Greffe de cellules allogéniques - Greffes de cellules adultes:  Cellules du foie :  mise au point d’un foie bioartificiel (suppléance hépatique transitoire et extra-corporelle dans des situations d’urgence)  transplantation d’hépatocytes (modifications in vitro)  voie d’avenir = adjonction de transgènes  Cellules pancréatiques (ilôts de Langherans) : pélèvements post- mortem, purification et inj. dans la veine porte du foie - Greffes de cellules fœtales = grande capacité de multiplication, immaturité permettant de diminuer le risque de rejet immunitaire  produits d’IVG ou ITG  CSH (cellules de foie fœtal) = indications voisines de celle de la greffe de MO sans pb d’incompatibilité  Neurones fœtaux : Maladie de Parkinson, Chorée de Huntington

Alternatives Cellules souches adultes: - unipotentes (peau, foie, intestin…) ou multipotentes (MO) - récemment : présence de cellules souches dans le SNC, capacités de transdifférenciation possédée par les cellules souches neuronales, hématopoïétiques, et mésenchymateuses - perspectives :  cellules souches neuronales  plasticité des cellules souches adultes : transdifférenciation des cellules sanguines et des cellules nerveuses Transdifférenciation : thérapie cellulaire +++  pas de pb éthique (règles de consentement)  pas de pb d’immunocompatibilité = greffes autologues sans clonage thérapeutique  limites Cellules souches embryonnaires :obtenues à partir d’embryons in vitro ou de fœtus avortés (embryons surnuméraires, ou prélèvement de cellules embryonnaires germinales sur fœtus mort)  pb éthiques liés à leur utilisation, et pb de multiplication excessive (risque de dégénérescence tumorale)

Aspects législatifs En France : Des difficultés d’élaboration de la loi : controverses scientifiques, éthiques et politiques! - loi sur la bioéthique du 29 juillet 1994 (modification de la loi Huriet de 1988): protection de la personne humaine potentielle; statut juridique de l’embryon en suspens; recherches uniquement sur les cellules fœtales obtenues par IVG; problème du clonage non abordé par le législateur janvier 2002 : projet de loi sur la bioéthique (révision) voté en 1ère lecture, sous la précédente législature janvier 2003 : Examen du Sénat  200 amendements (profond remaniement) décembre 2003 : Adoption en 2ème lecture du projet de loi présenté par JF Mattei ( texte plus conservateur)

Aspects législatifs Limitation de la recherche sur les embryons congelés surnuméraires ne faisant plus l’objet d’un projet parental (dérogation pour une durée limitée de 5 ans) Interdiction de la conception in vitro d’embryons à des fins de recherche ou de commercialisation Interdiction du clonage reproductif : « crime contre l’espèce humaine », passible de 30 ans de prison et 7.5 millions d’euros d’amende Interdiction du clonage thérapeutique : passible de 7 ans de prison et 100.000 euros d’amende Élargissement du champ d’application du DPI (diagnostic pré-implantatoire - février 2004 : examen du Sénat en 2ème lecture (en cours)

Italie : Aucune législation Irlande, Autriche, Suisse : Textes comparables à ceux du 29 juillet 1994 (parfois plus draconiens) Canada, Suède, Finlande, Espagne : Autorisation de l’utilisation des embryons surnuméraires pour la recherche médicale Suède : 9 mars 2004, projet de loi autorisant la création d’embryons destinés à la recherche. Royaume-Uni : Autorise le clonage thérapeutique But de recherche et thérapeutique du travail sur les embryons (< 14j) Japon, Pays-Bas, Belgique : Textes comparables à ceux de la France (appliqués ou en préparation) USA : Législation sur le financement de la recherche publique Autorise la recherche sur les lignées de cellules-souches existantes (pas de fonds pour le développement de nouvelles lignées) Aucune prohibition à condition que l’utilisation des embryons soit indispensable Parlement Européen : Contre le clonage d’embryons humains à des fins thérapeutiques

CONCLUSION Malgré les perspectives scientifiques offertes, le clonage thérapeutique se heurte à de nombreux problèmes: - objections d’ordre éthique : « instrumentalisation de l’embryon » - cadre législatif restrictif (interdiction en France) - risques médicaux liés à la technique de clonage (effets pathologiques durables?) - contrôle de la différenciation et prévention du risque tumoral Alternatives possibles et prometteuses: cellules souches fœtales et adultes *Récemment, injection de cellules souches adultes (sanguines) dans le myocarde après IDM (Lancet)