(enzym linked immunoSorbent Assay) Le test E.L.I.S.A. (enzym linked immunoSorbent Assay) Le test E.L.I.S.A. est un test immunologique ; il permet de détecter des anticorps sécrétés en réponse à une infection. Il est utilisé pour le dépistage du SIDA avec un second test de confirmation par immuno-transfert (Western-blot)
(enzym linked immunoSorbent Assay) Le test E.L.I.S.A. (enzym linked immunoSorbent Assay) Nous allons détecter la présence d’anticorps anti-P120 dans le sérum d’un humain.
La première étape : le « cotting » a été réalisée par le fournisseur; il s’agit de tapisser le fond des puits avec la P120 par effet électrostatique
Puis on ajoute le sérum à tester.
Si le sujet est « contaminé », son sérum possède des anticorps anti-P120
Si le sujet est « contaminé », son sérum possède des anticorps anti-P120
Ces anticorps anti-P120 viennent se fixer sur la P120 qui tapisse le fond du puits.
Ces anticorps anti-P120 viennent se fixer sur la P120 qui tapisse le fond du puits. On vide ensuite le puits d’un geste rapide.
Puis le puits est lavé avec une solution tampon twin pour enlever les quelques anticorps non fixés.
On ajoute a la solution des anticorps de détection, spécifiques de la partie constante des anticorps. On peut donc parler d’anti-anticorps! (oui je sais, ça devient compliqué pour les blondes…)
Les anticorps de détection se fixent aux anticorps anti-P120.
Les anticorps de détection se fixent aux anticorps anti-P120.
Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin
Le puits est vidé et lavé deux fois avec le tampon twin
On rajoute un substrat qui se lie aux anti-anticorps et provoque lorsque la liaison à lieu une réaction spécifique.
Ce substrat produit une coloration bleue lors de sa fixation irréversible.
La coloration bleue indique donc la présence d’anticorps anti P120. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration d’anticorps anti-P120 ; cette méthode permet donc un dosage par colorimétrie.
Et voilà vous savez tout sur le test E.L.I.S.A…