N Inoue, M Isawa, A Isotani , M Okabe Titre ? N Inoue, M Isawa, A Isotani , M Okabe Contexte de l’étude: Recherche des molécules spermatiques impliqués durant l’interaction gamétique (fixation à la zone pellucide , réaction acrosomique, fixation et fusion avec l’ovocyte..) Stratégie utilisée: - Des anticorps anti spermatozoides ont été produits et des tests d’interaction gamétique ont été réalisés en leur présence. Certains anticorps ont inhibé cette interaction gamétique. L’explication est qu’ils bloquent la fonction des protéines cibles (antigènes) qui ont un rôle dans l’interaction gamétique Des recherches pour identifier les antigènes cibles de ces anticorps sont menées Etude présentée: l’équipe d’OKABE a trouvé un anticorps OBF13 qui inhibe l’interaction gamétique Ils ont identifié une protéine cible qu’ils ont appelée Izumo. Leur objectif: caractériser et trouver la fonction de Izumo
Western blot Spz humains Différents tissus de souris . 30µg de protéine par piste 1 Cerveau, 2 cœur, 3 thymus, 4 rate, 5 poumon, 6 foie, 7 muscle, 8 rein, 9 ovaire, 10 testicule 11spermatozoïdes
immunofluorescence souris homme Sperme frais Marquage d’ izumo avec Anti izumo Marquage des acrosomes avec Green fluorescent protein(GFP) Marquage des acrosomes avec un anticorps dirigé contre un antigène de la membrane acrosomique interne
Inactivation du gène izumo chez la souris
Izumo-/-
Ovocyte récupéré chez une femelle accouplée avec un male Izumo-/- Marquage des spz ayant faits une réaction acrosomique Spz accumulés dans l’espace périvitellin
Interaction in vitro de spermatozoïdes +/- et -/- avec l’ovocyte dépéllucidé: fixation et fusion Les Spz fusionnés sont marqués en bleu
pp 234-238