Classe Bio 2 Briday Justine Joly Sandrine Lazzarin Nathalie
La chromatographie d'exclusion
Principe La chromatographie d'exclusion permet la séparation des molécules à travers un gel poreux en fonction du poids moléculaire de la protéine. En fonction: -de la taille -de la forme -poids moléculaire
Il existe 2 types de phases La phase stationnaire: elle est constituée de billes de polysaccharide La phase mobile:elle est constituée d'un éluant (eau,tampon pH),il sert à entraîner les molécules du mélange.
Passage à travers la colonne Les grosses molécules sont éluées en premier car leur volume est supérieur à celui du volume des billes. Les petites molécules sont exclus en dernier de part leur petit volume,elles subissent des frottements,leur migration est freinée.
Durée de rétention dans la colonne La durée de séjour dans la colonne augmente lorsque le poids moléculaire de la molécule diminue
Choix du type de gel Le choix du type de gel est effectué selon le domaine de fractionnement.
Qu'est ce que le domaine de fractionnement? C'est la gamme des masses molaires possibles pour lesquelles il y a : -diffusion partielle -diffusion totale -englobement de la masse molaire de la molécule
Les différents volumes Ainsi on note plusieurs volumes lors de la chromatographie: -le volume d'élution de la molécule -le volume d'exclusion du gel (volume d'élution d'une molécule non retardée par le gel) -le volume total du gel qui correspond au volume des billes.
Conclusion La chromatographie d'exclusion va permettre la séparation de différentes molécules selon leur taille.