Sérogroupage des Salmonella par Christiane Joffin

POURQUOI ? Obtenir la formule antigénique qui désigne le SÉROVAR, seul moyen de préciser l’identification d’une Salmonella

QUE RECHERCHE T’ON ? Ag O de paroi Ag H du flagelle pour les souches mobiles Ag Vi de la micro-capsule

1- Les antigènes des Salmonella

Voir dicitonnaire p 299

2- Le principe du sérogroupage des Salmonella

en utilisant des Ac connus COMMENT ? Après l’identification biochimique du genre Salmonella, on réalise à partir d’une culture PURE sur milieu non sélectif (GO, MH, Kligler) : une identification des Ag O, H (et Vi) de la bactérie en utilisant des Ac connus par une technique d’agglutination directe sur lame.

Procédure du sérogroupage Identifier : d’abord les Ag O de paroi, puis les Ag H de flagelle et éventuellement l’Ag Vi en utilisant des Ac connus spécifiques des Ag O (Ac anti O), des Ag H (Ac anti H) et de l’Ag Vi. Si les bactéries ont des Ag spécifiques des Ac utilisés connus, il va y avoir union Ag / Ac avec formation d’un réseau volumineux visible sous forme d’un agglutinat.

Agglutination des Salmonella par suite réaction Ag O/ Ac anti O Agglutination des Salmonella par suite d’une réaction Ag H / Ac anti H

3- Les réactifs pour le sérogroupage des Salmonella Voir dictionnaire p 296

Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum Origine des Ac : Ac fabriqués par des lapins et obtenus en recueillant leur sérum COÛT : 30 € les 3 mL 10 € par mL 10 000 € par L !!!!!!!!!!!!!!!! Soit 0,300 Kg d’OR.

3-1- Les Ac anti Ag O Des sérums O mélange Sérums (contenant un grand nombre d’Ac différents) : 6 sérums mélange (Omx : OMA, OMB, OMC, OMD, OMF, OMG) Des sérums O monovalents Sérums ne contenant qu’un seul type d’Ac : 1,2 / 4,5 / 6,7,8 / 7 / 8 / 9 / 3,10,15 / 10 / 15 / 1,3,19 / 11 / 13,22,23 / 6,14,24.

Ag spécifiques des Ac du sérum Sérum O mélange Ag spécifiques des Ac du sérum Groupes agglutinés OMA 1,2,3,4,5,9,10,12,19,21,46 A,B,D,E,L OMB 6,7,8,11,13,14,20,22,23,24 C,F,G,H OMC 16,17,18,28,30,35,38 I,J,K,L,M,N,O,P OMD 39,40,41,42,43,44,45 Q,R,S,T,U,V,W OMF 47,48,50,51,52,53 X,Y,Z,51,52,53 OMG 60,61,62,63,65,66,67

Les Ac anti Ag O monovalents Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMA ? Quel(s) Ac monovalent(s) utilisé(s) si agglutination avec le sérum OMB ? Ac anti 0 1, 2 pour le groupe A Ac anti 0 4, 5 pour le groupe B Ac anti 0 9 pour le groupe D Ac anti 0 3, 10, 15 pour le groupe E Le groupe le plus fréquent : groupe C à tester avec Ac anti 0 6 7 8

Des sérums H monovalents 3-2- Les Ac anti Ag H Des sérums H mélange Sérum contenant un mélange d’Ac anti Ag H Des sérums H monovalents Sérum ne contenant qu’un seul type d’Ac

3-3- Les Ac anti Vi Il n’existe d’un Ag Vi (microcapsule de S. Typhi S. PARATYPHI C S. Dublin) 18

4- La technique du sérogroupage Voir p 296

4-1- Les étapes du sérogroupage Premières étapes 1- S’assurer que la bactérie est bien une Salmonella 2- Vérifier que la souche n’est pas auto-agglutinable (réalisation d’un témoin de non auto-agglutinabilité en mettant les bactéries en présence d’eau physiologique)

Les étapes du sérogroupage (suite) Étapes suivantes : identification du (ou des) groupe(s) O 3- Identifier les groupes auxquels la bactérie appartient grâce à des sérums mélanges d’Ac anti-O OMA = agglutinines groupes A, B, D, E, L (contient Ag 1, 2, 3, 4, 5, 9, 10, 12, 19, 21, et 46) OMB = agglutinines groupes C, F, G, H (contient Ag 6, 7, 8, 11, 13, 14, 20, 22, 23, 24) Remarque : si pas d’agglutination avec OMA et OMB, il faudra rechercher si la souche possède l’Ag Vi en utilisant des AC anti Vi 4- Préciser l’identification des Ag O en utilisant des sérums Anti O (sérums monovalents) en les choisissant par ordre de fréquence de groupe.

Les étapes du sérogroupage (suite) Dernières étapes : identification du sérogroupe précis par identification des Ag H . 5- Identifier les Ag H parmi ceux possibles (en fonction du résultat de l’identification de l’Ag O) grâce à des Ac anti H (mélange et monovalent). Respecter l’ordre des fréquences de groupe. ATTENTION : nous ne disposons pas au laboratoire de tous les sérums nécessaires… Il faut donc faire au mieux !

4-2- Exemple de résultats d’un sérogroupage La bactérie n’appartient pas au groupe B 1 2 3 4 5 6 Sérum f OMA Anti O4, 5 Anti O 9 Anti H g, m Anti H l, v 7 Anti H 1, 5 Pas d’agglutination avec l’eau physiologique : Les bactéries testées ne sont pas auto-agglutinables, les autres résultats peuvent être interprétés Agglutination avec OMA : les Salmonella appartiennent aux groupes A, B, D, E, L Agglutination avec Anti O9 : les Salmonella appartiennent au groupe D Agglutination avec Anti H1 et H5 les Salmonella sont Salmonella Panama