ANALYSE CLONALE SOMATIQUE Définition d’un clone: groupe de cellules de même génotype (issu d’un même fondateur), au sein d’un individu de génotype différent. (par ex.: -/- au sein de +/-) Pour quoi faire? - analyse de mutations récessives létales. - génération de tissus mosaïque. - test d’autonomie cellulaire. Conditions: - induire des crossing-over dans des cellules en mitose. - pouvoir marquer le clone.

+ m + m + + m m Génotype: + / m + m

Recombinaison mitotique + Phénotype + + m + + m m + + m + + + + + m m m m m

Analyse clonale somatique : SYSTEME FRT-FLP Sites FRT flp Recombinaison site spécifique + m flp Génotype: + / m ; HS-FLP / +

Marquage des clones + m + m Clones jumeaux (« twin-spot » + + + + m m Choc thermique + flp + UB-GFP + + m m m m Génotype: + , UB-GFP , FRT / m , + , FRT ; HS-FLP / + m + Choc thermique + flp + + + m m m m myc-tag Génotype: + , FRT / m , mycTag , FRT ; HS-FLP / + m Clones jumeaux (« twin-spot »

Marquage des clones : négatif (GFP) + Choc thermique + flp + UB-GFP + + m m m m Génotype: + , UB-GFP , FRT / m , + , FRT ; HS-FLP / + m Prolifération Clones jumeaux (« twin-spot ») Clones jumeaux (« twin-spot »

Twin-spots Clones jumeaux (« twin-spot ») Prolifération, croissance HS-FLP ; FRT rasc40b mycTag / FRT , +, + ; en-GAL4, UAS-P35

+ m Marquage des clones : positif (GFP) Système MARCM + + m m m m flp Promoteur HS flp répresseur + + répresseur + m m UAS-GFP m m m UAS-GFP GAL80 GAL4 Promoteur Ubiquitaire Génotype: + , UB-GAL80 , FRT / m , + , UAS-GFP , FRT ; UB-GAL4 , HS-FLP / +

m m + z z maternel zygotique Activation du génome zygotique 1 2 3

L ’ovocyte se développe dans un cyste

CLONES GERMINAUX : technique « FLP-DFS » Phénotype Fs flp + Fs + Fs + m Fs + + m Fs + + m + Fs m Génotype: Fs , + , FRT / + , m , FRT ; HS-FLP / + Fs flp + Fs Fs + Fs + Fs + + m m + m + m + m

p-actine GAL4 p-actine GAL4 GFP gène X UAS UAS yellow Promoteur HSP 70 FRT p-actine GAL4 GFP gène X p-actine FRT yellow GAL4 UAS UAS Promoteur HSP 70

ELEMENTS TRANSPOSABLES : P

+ TRANSFORMATION : LIGNEES TRANSGENIQUES transposase transposase rosy white G418 LacZ GAL4 UAS Gène X ......

APPLICATIONS ET TYPES D'ELEMENTS P - vecteurs d'expression (gène X; lacZ; GAL4; GFP; FRT; Flipase;...) - pièges ("enhancer-trap"; "gene-trap" ; "protein-trap") - rapporteur (UAS;) - mutagène

Vecteur d'expression gène X; lacZ.... promoteur

ENHANCER-TRAP ENHANCER LacZ Promoteur minimal

"PROTEIN-TRAP" SD SA GFP

GAL4 tissu-spécifique "GENE-TRAP" DEREGULATION phénotype GAL4 Gène X UAS (5X) Gène X phénotype

WT en-GAL4 sans effet Régulateur positif Régulateur négatif

TRACAGE DES CELLULES

Cycle rétroviral

GENES RAPORTEURS P7 Nicolas, J.F. et al. Development. 1996. 122:2933-46 Eloy-Trinquet, S. et al Curr Top Dev Biol. 2000. 47:33-80