Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Dosage de l’hémoglobine Principe Dosage en images Résultats.

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1 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Dosage de l’hémoglobine Principe Dosage en images Résultats

2 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET L’hémoglobine Molécule hétéroprotéique tétramérique : 4 chaînes de globine associées chacune à une molécule d’hème par liaison du fer à des résidus d’histidines contenue à saturation dans l’hématie normale responsable du transport des gaz (en particulier le dioxygène) par fixation entre le fer (Fe 2+ ) de l’hème et la chaîne protéique Molécule oxydable en méthémoglobine (Fe 3+ ) instable et non fonctionnelle Di oxygène Fer Histidine proximale Hème Histidine distale Monomère d’hémoglobine

3 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Principe du dosage de l’hémoglobine Ajout de réactif de Drabkin au sang Hémolyse les globules rouges libérant l’hémoglobine Oxydation de l’hémoglobine en méthémoglobine (Fe 3+ ) par les ions ferricyanures Hexacyanoferrate III de potassium K 3 [Fe(CN) 6 ] Formation d’un complexe : la cyanméthémoglobine grâce aux ions cyanures Cyanure de potassium KCN Hb (Fe 2+ ) MetHb (Fe 3+ ) CN -, MetHb (Fe 3+ ) [Fe(CN) 6 ] 3- [Fe(CN) 6 ] 4- CN -

4 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Principe du dosage de l’hémoglobine Mesure de l’absorbance (A) de la solution diluée obtenue parallèlement à un étalon de concentration massique connue à 540 nm (pic d’absorption maximale de la cyanméthémoglobine) avec proportionnalité entre l’absorbance et la concentration massique pour des solutions très diluées (Loi de Beer Lambert)

5 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Organisation du poste Préparation du matériel nécessaire et en particulier remplissage des tubes par 5 mL de réactif de Drabkin Dosage en images

6 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Prélèvement du sang Homogénéisation Aspiration de 20 µL Essuyage du cône Dosage en images

7 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Dilution dans le liquide de Drabkin Rinçage du cône par aspiration refoulement du réactif de Drabkin surnageant Dépôt des 20 µL dans les 5 mL de réactif de Drabkin Dosage en images

8 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Homogénéisation de la solution Homogénéisation par retournement après bouchage du tube par du parafilm Dosage en images

9 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Mise en cuve et lecture au spectrophotomètre Remplissage d’une cuve de spectrophotomètre Lecture à 540 nm du témoin réactif, de l’étalon et de l’essai Dosage en images

10 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Gestion des déchets Élimination immédiate des déchets : cônes, papiers souillés … gants Élimination des solutions contenant du réactif de Drabkin dans un conteneur dont le contenu sera traité par de l’eau de Javel Dosage en images

11 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Résultats Expression de la concentration massique d’hémoglobine contenue dans un litre de sang pur  essai en g d’Hb/L de sang = A essai x  étalon A étalon

12 Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET Interprétation Valeurs de référence 120 à 160 g d’Hb /L sang 140 à 180 g d’Hb /L sang Résultat inférieur aux valeurs seuils  Anémie Résultat supérieur aux valeurs de référence  Polyglobulie probable (à confirmer par un hématocrite et une numération érythrocytaire élevés) Valeurs seuils 110 g d’Hb /L sang 130 g d’Hb /L sang