I- Une des causes du diabètes insipide néphrogénique congénital: mutation dans le gène codant pour le récepteur V2 II- Une des causes du diabètes.

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4 I- Une des causes du diabètes insipide néphrogénique congénital: mutation dans le gène codant pour le récepteur V2 II- Une des causes du diabètes insipide néphrogénique congénital: mutation dans le gène codant pour l’aquaporine 2 III- Traitement du diabète insipide néphrogénique congénital: L’hydrochlorothiazide IV- Une cause du diabète insipide néphrogénique acquis : LE LITHIUM

5 récepteur V2I) Cause I: Mutation dans le gène codant pour le récepteur V2 l’AQP2II) Cause II: Mutation dans le gène codant pour l’AQP2 III) Traitement du diabète insipide néphrogénique congénital: L’hydrochlorothiazide Diabètes insipide néphrogénique congénital IV) Une cause du diabète insipide néphrogénique acquis : LE LITHIUM Diabètes insipide néphrogénique acquis

6 Une des causes du diabètes insipide néphrogénique congénital: mutation dans le gène codant pour le récepteur V2

7 Étude de cas Dans cette étude, une famille Q5 ayant le diabète insipides néphrogènique possèdant le chromosome-X typique récessif hérité, a été étudiée. Un des patients (III) a été investigué et cela a révélé l’absence de réponse du récepteur V2 intermédiaire rénal et extrarénal pour lui et un autre membre de la famille Q5. Ensuite, amplification du open-reading frame (OPR) ainsi que 2 intron du V2 récepteur gène par réaction en chaîne de polymérase (PCR) du génome ADN de la famille Q5 et de certains volontaires en santé. Résultats : - aucune restriction enzymatique analysée de produits PCR provenant du patient (III) ne révèle d’anomalies. Les produits de la réaction en chaine polymérase (PCR) du patient (III) ont été clonées et séquencées et ils ont trouvé 2 déviations toutes deux provenant du ORF.

8 Suite de l’étude La première déviation montrait qu’il y avait une conversion (A---G) à la position 927 de la séquence ADN complémentaire qui ne résultait pas à un changement de Codon. La deuxième déviation montrait l’effacement d’un des 6 guanosines consécutifs dans la séquence cADN. Cela crée un changement du Codon 246 de GGG-----GGC altérant l’acide aminée séquencé et un Codon stop prématuré TGA à la position 270. Par conséquent, cet individu va manquer le troisième terminal carboxylique entier et il ne pourra que conserver 17 des 42 acides aminées de la troisième boucle intracellulaire. On a remarqué aussi qu’un trucage b2-adrenorecepteur qui, comme le V2 récepteur couplé au système Gs- adénylate cyclase, est lui aussi inactif. Ceci suggère fortement que le Q5 mutant est incapable d’effectuer la transduction d’un signal.

9 Résultats de l’étude Pour tester si l’occurrence du gène mutant est consistante avec un mode d’héritage X-linked, ils ont analysés des gènes de patients en sante; le frère (III2) et sa mère (II2). Ni une conversion ni un effacement n’ont été détecté chez le frère. Ceci montre que le patient (III) et son frère en santé ont hérité des allèles différents du gène récepteur V2. Des 12 des clones de la mère, 7 ont montré des conversions et des effacements tandis que 5 étaient normaux. Les chercheurs ont aussi amplifié des portions du gène récepteur V2 par asymétrie de PCR. Chez le patient (III) et son frère en santé, on a pu observer une proportion égale de séquences mutantes chez l’un et de séquences normales chez l’autre tandis que la séquence obtenue du PCR de la mère démontrait clairement des séquences génétiques des deux types, c’est-à-dire du type sauvage et du type mutant. Ces résultats identifient clairement la mère comme étant la porteuse du gène mutant.

10 Découvertes inovatrices Récemment, ils ont localisé le gène récepteur V2 à la portion q28- gter du chromosome. Cette découverte ainsi que celle du gène mutant Q5 nous a mené à la conclusion que le gène CDNI est identique au gène récepteur V2. Il reste quand même encore à voir si l’effacement qui donne la mutation Q5 se manifeste dans d’autres familles canadiennes ayant CDNI. Un autre patient d’une autre famille non relié (o-1) a été analysé au cours de cette recherche et ils n’ont pas trouvé de mutation Q5 mais après clonage et le séquencement de petits produits obtenus par asymétrie PCR, on révèle une conversion C-----A au niveau des nucléotides 395 de la séquence cADN causant un changement au niveau du Codon de GCC (alanine) à GAC (acide aspartique). Cette anomalie n’a pas été trouvée dans les gènes du frère du patient et les deux allèles normales et mutantes étaient amplifie à partir de l’ADN génomique de la mère.

11 En conclusion… Les patients ayant CDNI répondent à l’adrénaline et à l’hormone parathyroïde (mais non à l’Arginine Vasopressine ou ses analogues) avec une augmentation de concentration du cycle plasmique AMP et de l’excrétion urinaire cAMP respectivement. Ainsi, un défaut génétique dans le composant omniprésent du signal de transduction (le système Gs-adénylate cyclase) comme il arrive dans le pseudo-hypoparathyroïdisme de type Ia17, n’est pas très probable. Sur la base des résultats et observations des recherches ; les patients atteints de CDNI manquent généralement de récepteurs V2 et de réponse de médiation rénal et extrarénal à l’Arginine Vasopressine. Leur prédiction : trouble fréquemment associé à un défaut du gène récepteur V2.

12 Une des causes du diabètes insipide néphrogénique congénital: mutation dans le gène codant pour l’aquaporine 2

13 ``Patients with autosomal Nephrogenic Diabetes Insipidus Homozygous for Mutation in the Aquaporin 2 water-Channel Gene’’. Quelle est une cause du diabètes insipide néphrogénique congénital?

14 Hypothèses Hypothèses: Dysfonctionnement de la protéine responsable pour le passage de l’eau à l’intérieur de la cellule (l’AQP2) Mutation dans le gène codant pour la protéine Mutation récéssive

15 Méthode Détection de mutations: Prélèvement, analyse, séquencage des ADNs de 3 patients positifs pour le diabètes insipide néphrogénique et de leurs parents AQP2 non-fonctionnelle, responsable du NDI: Analyse de la perméabilité des oocytes injectés des ARNms mutés et/ou sauvages (codant pour l’AQP2)

16 Résultats: I- Analyse des ADNs

17 Expériences et Résultats AQP2 sauvage Eau AQP2 muté AQP2 mutée et AQP2 sauvage

18 Conclusion Patients souffrant de diabètes sont homozygotes pour des mutations dans le gène codant pour l’aquaporine 2 Les parents (hétérozygotes) ne démontrent aucun signe de diabètes  Mutation récéssive

19 Conclusion Cellules injectées avec ARNm muté, possèdent des protéines AQP2 non-fonctionnelles d’où l’absence d’absorption  faible osmolalité. Osmolalité comparable à celle d’une cellule n’ayant aucune protéine.  Un ARNm muté code pour des AQP2 non- fonctionnelles

20 Conclusion Mais… Osmolalité cellules avec un ARMm muté ET un ARNm normal = Osmolalité cellules avec ARNm normal (uniquement)  Un hétérozygote ne présente pas les symptômes de la maladie  mutation récéssive  D’où l’absence de de symptomes chez les parents des patients

21 Traitement du diabète insipide néphrogénique congénital: L’hydrochlorothiazide Groupe de trente hommes, âgés de un mois à quarante ans Mutation génétique sur le récepteur V2—G185C Suivi des patients est d'observer les effets du traitement en se concentrant sur le poids et la hauteur des patients

22 Méthodologie Les données de croissance ont été recueillies et enregistrées à intervalles réguliers Calculés et comparés dans les percentiles dans un tableau de distribution normale

23 Résultats: I- Comparaison entre l’âge et le poids

24 II- Comparaison entre la hauteur et le poids

25 Conclusion Il ne montre pas de fortes corrélations dans l'amélioration globale des patients En raison du nombre de mutations différentes qui peuvent affecter les récepteurs V2 N’est pas efficace pour toutes les souches de diabète insipide nephrogenique La majorité de cas pour les patients avec traitement, il y a un phenotype clinique commun

26 Une cause du diabète insipide néphrogénique acquis : LE LITHIUM

27 Dans cet exposé 1. But de l’étude 2. Gros plan sur l’action de lithium dans le rein 3. Matériel et méthode 4. Résultats 5. Conclusion

28 But de l’étude Partie A Partie B Efficacité de l’amiloride sur traitement du diabète insipide induit par le lithium. (NE FERA PAS PARTIE DE NOTRE EXPOSÉ)

29 Le Lithium Contenu dans les médicaments pris pour soulager les troubles de l’humeur. Pénètre dans les cellules du tube collecteur du néphron par les canaux à sodium. inhibe la migration des aquaporines 2 vers la membrane apicale.  diminution capacité de réabsorption d’eau.  diminution capacité de concentrer l’urine.

30 Matériel et méthode

31 RESULTATS Osmolalité de l’urine et quantité de cAMP cycliques et de AQP2 excrétés par les particapants, selon la durée d’exposition au lithium.

32 Conclusions de l’étude 1. Le lithium inhibe la réponse des AQP2 à l’action de la vasopressine. 2. Ceci provoque une baisse de capacité de concentration d’urine, d’où excrétion d’urine très diluée et en grande quantité. Le taux de AMPc et AQP2 excrétés dans l’urine diminue aussi. 3. L’incapacité à concentrer l’urine augmente avec la durée d’exposition au lithium.