Réactions de fixation du complément

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1 Réactions de fixation du complément
Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

2 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS)
Rappels Système du complément = ensemble de protéines synthétisées par les hépatocytes à l’état inactif présentes dans le plasma et la lymphe Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

3 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS)
Rappels Activation des protéines du complément (C’) par contact avec les enveloppes des microorganismes. par liaison à un site particulier des Ac, démasqué lors de la formation d’un complexe immun Activation des protéines du C’ en cascade produisant des composés à action : cytolytique par formation du complexe d’attaque membranaire (CAM), chimiotactique opsonisante. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

4 Cytolyse provoquée in vitro par le Complément (C’)
Formation d’un système hémolytique > Globules rouges de mouton (GRM) sensibilisés par des anticorps antiGRM 2) Activation du C’ en cascade C’ 3) Hémolyse provoquée par la formation de CAM C’ Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

5 Principe des réactions de fixation du complément
Préliminaire : Décomplémentation du sérum par chauffage 30 min. à 56°C Élimination de toute autre source de complément que le réactif Calibration de la quantité de C’ présent lors de la réaction Titrage du C’ qui sera utilisé dans la réaction de fixation Préparation d’une gamme de dilution du C’ Mise en contact avec le système hémolytique Détermination du titre : plus forte dilution présentant une hémolyse totale Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

6 Principe des réactions de fixation du complément
1ère étape : Fixation Mise en contact : Sérum + Ag + C’ Sérum positif Sérum négatif C’ C’ C’ libre : activation possible par un complexe immun C’ fixé : activité résiduelle nulle C’ Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

7 Principe des réactions de fixation du complément
2ème étape : Révélation Ajout du système hémolytique Sérum positif Sérum négatif C’ C’ C’ Pas d’hémolyse (NH) Hémolyse (HT) Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

8 Conditions opératoires
Nécessaires aux activités enzymatiques de la cascade d’activation du complément Température : 37°C Tampon VCM : Véronal, Calcium, Magnésium Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

9 Absence d’activité antiC’ de l’Ag Absence d’activité antiC’ du sérum
Témoins Nom Composition Résultat attendu Validation Témoin GR Témoin GRS Témoin C’ Témoin Ag Témoin Sérum Tampon GR Tampon GRS Tampon GRS C’ Tampon GRS, C’ Ag Tampon GRS, C’ Sérum NH NH HT HT HT Absence d’activité antiC’ de l’Ag Absence d’activité antiC’ du sérum Stabilité des GR Stabilité des GRS Activité du C’ sur le SH Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

10 Résultats Sédimentation = NH Hémolyse partielle = HP
Hémolyse totale = HT Fixation complète du C’ Fixation partielle du C’ C’ non fixé Absence d’Ac spécifiques Présence d’Ac spécifiques Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

11 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS)
Interprétation Analyse des témoins Témoins GR et GRS = NH : Globules Rouges de Mouton Sensibilisés ou non utilisés stables dans les conditions opératoires Témoins C’ = HT : Système Hémolytique GRM-antiGRM totalement hémolysé par le C’ (bonne quantité de complément et bon équilibrage sur SH) Témoin Ag = HT : Antigène utilisé sans activité anticomplémentaire Témoin Sérum = HT : Sérum à tester sans activité anticomplémentaire. Conformité de tous les témoins = validation des réactifs et du sérum. Titre du sérum = plus forte dilution du sérum qui fixe totalement (ou partiellement) l’activité du complément. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET