titre Techniques de numération suspensions bactérienne.

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1 titre Techniques de numération suspensions bactérienne.
Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. Numération sur milieu solide ensemencement en surface. Numération sur milieu liquide Détermination du NPP. Etablissement de la courbe de croissance.

2 Au fait, comment on détermine la gamme de dilution?
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 principe ens masse Au fait, comment on détermine la gamme de dilution? t = 30 mn Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse. On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL-1 La concentration cible doit être voisine de 300 bact.mL-1 On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible.

3 technique masse 1 Numération sur milieu solide
ensemencement dans la masse. 2 variantes: On verse l’inoculum dans 9 mL de gélose en surfusion. 10-5 10-6 10-7 technique masse 1 On mélange et on verse dans une boîte de Pétri. t = 30 mn Technique d’ensemencement. On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL-1 La concentration cible doit être comprise entre 30 et 300 bact.mL-1 On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible.

4 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse.
2 variantes: On verse l’inoculum dans la boîte de Pétri. 10-5 10-6 10-7 technique masse 2 On verse la gélose en surfusion et on mélange doucement. t = 30 mn Comment choisir entre les deux ? Technique d’ensemencement.

5 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse.
On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. 10-5 10-6 10-7 n = [( )/ ]/3 = 23,1 bact.mL-1 calculs masse 30 mn t = 30 mn N30mn = n / D = 23, bact.mL-1 Calculs. 1500 203 24 trop 250 19

6 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse.
RETOUR On compte les colonies. On analyse les résultats. Je suis désolée de te le dire, mais la dilution a été mal choisie ! On calcule la moyenne. 10-5 10-6 10-7 n = [( )/10 + ( )]/4 = 55,4 bact.mL-1 calculs masse 150 mn t = 150 mn N150mn= n / D = bact.mL-1 Calculs. trop 554 55 trop 552 56

7 Au fait, comment on détermine la gamme de dilution?
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 principe ens surf Au fait, comment on détermine la gamme de dilution? t = 60 mn On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL-1 Numération sur milieu solide ensemencement en surface. La concentration cible doit être comprise entre 300 et 3000 bact.mL-1 On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible.

8 technique surf Numération sur milieu solide ensemencement en surface.
On dépose l’inoculum sur la gélose d’une boîte de Pétri. 10-6 10-7 10-8 On étale au râteau. technique surf t = 60 mn Technique d’ensemencement.

9 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse.
On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. 10-6 10-7 10-8 n = [( )/10 + ( )]/4 = 38,3 bact.mL-1 calculs surf 60 mn t = 60 mn N150mn= n / D = 38, bact.mL-1 Calculs. 374 41 5 369 38 5

10 Numération sur milieu solide ensemencement dans la masse.
RETOUR On compte les colonies. On analyse les résultats. On calcule la moyenne. 10-6 10-7 10-8 n = (72+ 76)/2 = 74 bact.mL-1 calculs surf 120 mn t = 120 mn N150mn= n / D = bact.mL-1 Calculs. 689 72 7 645 76 8

11 Au fait, comment on détermine la gamme de dilution?
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10 10-11 principe NPP Au fait, comment on détermine la gamme de dilution? t = 90 mn On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL-1 Numération sur milieu liquide Détermination du NPP. La concentration cible doit être voisine de 1 bact.mL-1 On prépare en plus les 4 dilutions qui encadrent la cible.

12 technique NPP + + + + + + - + - + - - - - -
Numération sur milieu liquide Détermination du NPP. 10-7 10-8 10-9 10-10 10-11 technique NPP t = 90 mn Technique d’ensemencement. On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que 0,1 UA correspond à bact.mL-1 La concentration cible doit être voisine de 1 bact.mL-1 On prépare en plus les 4 dilutions qui encadrent la cible.

13 Numération sur milieu liquide
Détermination du NPP. On note le code. On consulte Mc Grady. On calcule la concentration. calculs NPP N90mn= n / D = bact.mL-1 t = 90 mn N90mn= n / D = 0, bact.mL-1 Calculs RETOUR Mac Grady : NPP = 7 Mac Grady : NPP = 0,7

14 t Abs 0,108 15 0,149 30 0,207 45 0,286 60 0,396 75 0,548 90 0,759 105 1,050 120 1,454 135 2,010 150 2,785 165 3,850 180 5,330 195 7,380 t Abs C 0,108 15 0,149 30 0,207 2,3.108 45 0,286 60 0,396 3,8.108 75 0,548 90 0,759 7,0.108 105 1,050 120 1,454 14,8.108 135 2,010 150 2,785 165 3,850 180 5,330 195 7,380 D t Abs 0,108 15 0,149 30 0,207 45 0,286 60 0,396 75 0,548 90 0,759 2 105 0,525 120 0,727 5 135 0,402 150 0,557 10 165 0,385 180 0,533 20 195 0,369 Pour établir le graphe, on établit les absorbance théorique avant dilution. On reporte les valeurs calculées. courbe croiss On compare les deux courbes. Les deux courbes sont superposables (a = 0,021). Etablissement de la courbe de croissance. k = 1, / 0,108 = 1, bact.UA RETOUR