DPI pour maladies dominantes avec mutation de novo (ou sans apparenté atteint disponible) : la prise en charge est possible. Assises de Génétique Humaine.

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1 DPI pour maladies dominantes avec mutation de novo (ou sans apparenté atteint disponible) : la prise en charge est possible. Assises de Génétique Humaine et Médicale Lyon, 4 février 2016. Emmanuelle KIEFFER, PhD Laboratoire de Diagnostic Préimplantatoire Strasbourg

2 L’expérience Strasbourgeoise (2006 – 2015) :  55 demandes  42 tests développés (+ 6 en cours)  dont 30 depuis 2012

3 DPI pour formes familiales DPI Détermination de l’haplotype associé à l’allèle muté en amont du DPI. Diagnostic indirect possible. Haplotypes / Marqueurs microsats Mutation Légende / représentation schématique :

4 DPI pour néomutations Recherche de la mutation obligatoire  mise au point pour chaque couple. « Haplotypage »: Détermination de l’haplotype associé à la mutation, avant ( ♂ ) ou lors ( ♀ ) du DPI. ? ?

5 Haplotypage  Néomutation ♂ :  Sperm typing (>20 spz).  Avec le test multiplex validé sur cellules uniques.  Néomutation ♀ :  Au moment du DPI, directement sur les embryons.  Intérêt des ADN parentaux pour anticiper phase des marqueurs entre eux. DPI

6 Difficultés (1)  Visualisation de la mutation :  Allele Drop Out - ADO (~5-10%) – absence d’amplification d’un des deux allèles  Contamination (rare)  Nécessité d’analyser suffisamment de spz / d’embryons !!!  DPI : analyse de 2 cellules / embryon systématiquement. DPI "ADO" ADO c1 c2 c1 c2 c1 c2 DPI Conta. c1 c2 c1 c2 c1 c2 Conta.

7 Difficultés (2) : mosaïques  Lymphoblastes isolés : « ADO » / mutation +++  Mosaïque ?  Spermatozoïdes isolés : deux populations avec le même haplotype (marqueurs), +/- mutation  Mosaïque germinale ?  Par précaution (risque d’ADO) : rejet des embryons porteurs de l’haplotype qui est associé à la mutation. DPI c1 c2 c1 c2 c1 c2 Non transférablesTransférable x15x8x7 X 40 X 20

8 Exemple DPI Distance / APC D5S2027 945 kb D5S1965 281 kb Exon 15 (sizing) D5S346 32 kb D5S2001 613 kb D5S421 672 kb 164 / 168 228 / 228 252 / 252 112 / 122 213 / 219 161 / 165 164 / 170 228 / 235 247 (del) / 252 (N) 110 / 112 215 / 216 150 / 165 APC c.3901-3905delACCCT ; Thr1301fs1312X exon 15 De novo 164 / 166 228 / 228 252 / 252 110 / 112 215 / 215 165 / 163 Mutation absente 170 / 170 228 / 235 252 / 252 112 / 112 215 / 216 167 / 150 164 / 170 228 / 235 ( 247 (del) / 252 (N) ) 110 / 112 215 / 216 165 / 150 165 / 168 228 / 228 252 / 252 122 / 112 213 / 219 165 / 161  Développement multiplex (5 marqueurs + exon 15)  Sperm typing D5S2027 D5S1965 Exon 15 (sizing) D5S346 D5S2001 D5S421 D5S2027 D5S1965 Exon 15 (sizing) D5S346 D5S2001 D5S421 164 228 252 / 247 122 / 110 213 / 215 165 (1c) 164 228 252 / 247 122 / 110 213 / 215 165 (2c) 164 / 170 228 / 235 252 122 / 112 213 / 216 165 / 150 (2c) 164 / 170 228 / 235 247 (del) / 252 (N) 110 / 112 215 / 216 165 / 150 164 228 252 / 247 122 / 110 213 / 215 165 (1c) 164 228 252 / 247 122 / 110 213 / 215 165 (2c) Mutation absente

9 Résultats Nb Biopsies / DPI 39 (23 couples dont 13 avec mut. maternelle ) Embryons avec résultat (embryons analysés) 233 (98% emb analysés) (237 ; moy. 6,1 / DPI) Nb E transférables - atteints101 - 109 Nb Transferts (Nb E) 33 (36) Nb Congélations d‘E sains surnuméraires (Nb E) 10 (19) Nb Transfert d’E sain surnuméraire congelé (Nb E) 2 (2) Nb de grossesses cliniques (couples) 11 (10) Nb accouchements (Nb bébés) * 5 (5) + 2 g. en cours *4 Grossesses arrêtées : 3 FCS <12 SA (dont 1 sur g. gém.) + 1 IMG <22SA pour T21.

10 Conclusion  DPI pour mutations de novo :  Possible !  Mise au point systématique + particularités.  Nécessité de bons paramètres pour la FIV.  Biopsie 2 cellules systématiquement.  Attention aux mosaïques !  Information des couples !  Forme familiale mais pas d’ADN d’apparenté atteint : même démarche, sans risque de mosaïque.

11 Equipe du Laboratoire de DPI à Strasbourg Responsable : Dr Céline MOUTOU Génétique Moléculaire Dr Céline Moutou Nadia Bihemi Dr Emmanuelle Kieffer Nathalie Gardes Jean-Christophe Nicod Equipe d’AMP bio Dr Isabelle Lichtblau Biopsie Dr Catherine Celebi Dr Isabelle Koscinski Nicolas Becker Nathalie Ruch Conseil Génétique Claire Kastner Secrétariat DPI Laetitia Mosser Elodie Schaaf Cytogénétique Dr Philippe Gosset Sarah Casalanguida Caroline Retter Estelle Berthe Equipe clinique AMP-DPI Dr Olivier Pirrello Dr Catherine Rongières - Marie-Paule Bailly Carole Bilger Sages-femmes & secrétaires