L’activation de ERK induite par EGF provoque la dissociation de l’heterodimere -caténine /-catenine et la transactivation de la -catenine via ck2.

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1 L’activation de ERK induite par EGF provoque la dissociation de l’heterodimere -caténine /-catenine et la transactivation de la -catenine via ck2

2 Introduction ARTICLE :
-caténine/voie Wnt impliquées dans l’activité transcriptionnelle Cellules cancéreuses Activité accrue voie Wnt Quantité accrue de -caténine dans le noyau ARTICLE : Rôle d’EGF, ERK et CK2 : dissociation hétérodimère caténine et transactivation B-caténine

3 Voie Wnt Nucléaire : Tcf/Lef-1 activés par B-caténine
Facteurs de transcription Sous membranaire : complexe E-cadhérine/a-caténine/B-caténine Dissociation par phosphorylation de a-cat

4 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
Dissociation du complexe ~ temps d’exposition à EGF

5 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
EGF : Dissociation du complexe a-cat/b-cat Membrane: diminution de b-cat Cytosol : augmentation de a-cat Noyau : augmentation de b-cat

6 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
Traitement EGF 24 h : B-cat : accumulation nucléaire A-cat : présence membranaire et cytoplasmique Absence de colocalisation a-cat/b-cat

7 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
Augmentation a-cat : inhibition internalisation b-cat (après exposition EGF)

8 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
EGF augmente l’activité transcriptionnelle de TCF/Lef-1 En présence d’a-cat, activitié transcriptionnelle moindre

9 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
shRNA : déplétion en a-cat Contrôle : activité transcriptionnelle élevée en présence d’EGF A-cat shRNA : activité transcriptionnelle forte en présence et en absence d’EGF

10 Action d’EGFR actif sur le complexe cat
A-cat et b-cat sans stimulation par EGF : complexe sous membranaire Activation EGFR : dissociation du complexe Translocation nucléaire de b-cat Activation tcf/Lef-1 par b-cat dans le noyau

11 Phosphorylation de a-catenine par ck2
Après stimulation par EGF Phosphorylation sur sérine en position 641 de l’a-cat

12 Phosphorylation de a-catenine par ck2
(résultats in vitro) En absence de CK2 : pas d’a-cat phosphorylée En présence de CK2 : a-cat phosphorylée en position 641

13 Phosphorylation de a-catenine par ck2
(in vivo) Phosphorylation de a-cat WT par CK2 A-cat mutée (S641A) non phosphorylée par CK2

14 Phosphorylation de a-catenine par ck2
Traitement par EGF (30 minutes) Augmentation de la quantité d’a-cat phosphorylée aux niveaux membranaire et nucléaire

15 Phosphorylation de a-catenine par ck2
Traitement par EGF Interaction FLAG-WT a-cat/CK2 ~ temps d’exposition à EGF

16 Phosphorylation de a-catenine par ck2
Déplétion en CK2 par shRNA (non totale) Exposition à EGF : Contrôle : phosphorylation de S641 (a-cat) Cellules shRNA CK2 : pas de phosphorylation

17 Phosphorylation de a-catenine par ck2
EGF induit la phosphorylation de a-cat en S641 par activation de CK2

18 La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat
Ajout de CK2 provoque la dissociation du complexe a-cat (WT)/b-cat Dissociation du complexe, quelle que soit la quantité d’a-cat A-cat mutée : pas de dissociation par CK2

19 La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat
Inactivation de CK2 : augmentation de la liaison a-cat/b-cat

20 La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat
Déplétion de CK2 par shRNA et action de EGF Pas de dissociation de l’hétérodimère

21 La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat
Cellules transfectées avec a-cat WT, S641A ou S641D/pas d’exposition à EGF S641A : liaison a-cat/b-cat augmentée S641D : liaison a-cat/b-cat moindre Idem aux niveaux membranaire et nucléaire

22 La phosphorylation d’a-cat l’empeche de se lier à b-cat