Enzyme-linked immuno sorbent assay "ELISA"BOUKHARI MARWA

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1 Enzyme-linked immuno sorbent assay BOUKHARI MARWA 2015-2016

2 Introduction. Définition. Matériels et réactifs. Principe d’ELISA. Les types. Applications. Conclusion.

3 La technique d'ELISA a été conceptualisée et développée par 2 scientifiques suédois, Peter Perlman(investigateur principal) et Eva Engvall à l'Université de Stockholm en 1971. A la fin des années 60, Stratis Avrameas et GB Pierce mettent au point la technique d'immuno- enzymologie, technique d'analyse par réaction entre antigènes et anticorps et utilisant comme marqueur des enzymes. BOUKHARI MARWA

4 ELISA signifie Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay. Le test E.L.I.S.A. est un test immunologique. la détection des protéines, AC, Ag. Cette technique est utilisée (entre autre) pour le dépistage du virus. BOUKHARI MARWA

5 Les matériels et les réactifs Plaques en polystyrène de 96 puits à fond plat. Micropipette Pissette, tubes, micro- tubes. l’Ag AC AC de détection + enzyme substrat spécifique à l’enzyme. BOUKHARI MARWA

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7 L’Elisa est une technique immuno- enzymatique de détection qui permet de visualiser une réaction Ag-AC grâce à une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps. BOUKHARI MARWA

8 ELISA direct. ELISA indirect. ELISA sandwich. ELISA compétitif. ELISA non-compétitif BOUKHARI MARWA

9 Etape n° 1:Etape n° 2 : Etape n° 3:Etape n° 4: incuber dans des puits, la solution d‘AG spécifique de l‘AC recherché. incube à 37°C dans les puits, la solution d‘AC à doser pendant 30 minutes à 2h On incube dans les puits, la solution d’AC de d é tection ils se fixent sp é cifiquement sur les AC à doser. L’ajout de substrat pour l'enzyme. L'apparition d'une coloration

10 EE S P Etape n° 1 : Etape n° 2:Etape n° 3 : Laver L’Ag à tester est absorbé sur le fond du puits en polystyrène. L’AC conjugué a un enzyme spécifique a l’ag est ajouté. La réaction colorée est effectué par l’ajout du substrat chromogène.

11 fixer sur le support, l‘AC de capture à 37°C pendant 2h On dépose l'échantillon possédant l'antigène à identifier On fixe l‘AC de détection couplé à une enzyme sur l‘Ag recherché. On dépose le substrat pour l'enzyme et on laisse incuber. Le produit de réaction obtenu est soluble et coloré. L'intensité de cette coloration peut être mesurée à l'aide d'un photomètre.

12 Etape n° 1: Etape n° 2 : Etape n° 3: Etape n° 4: L’anticorps primaire (non marqué) est incubé avec l‘Ag de l'échantillon. Ag-AC sont ajoutés aux plaques à 96 puits qui sont prétraitées avec le même Ag. peu d'Anticorps se fixeront aux puits puis qu'ils sont déjà tous en couple ! Ils seront donc évacués au rinçage, et la coloration qui suivra sera donc très faible.

13 Le but de teste ELISA indirect: la détection d'anticorps Le but de teste ELISA direct: la détection d'antigènes ELISA compétitif: la concentration d’Ag est inversement proportionnelle à la couleur produite. ELISA sandwich: la concentration d’Ag est proportionnelle à la couleur produite. BOUKHARI MARWA

14 La limite de détection est moins bonne que la technique RIA. La réaction enzymatique rend cette technique dépendante de la température, du pH et l'éclairement. BOUKHARI MARWA

15 La sensibilité, la fiabilité et, éventuellement, la rapidité et la facilité d’exécution. Détection spécifique. Technique sensible. Pas besoin d’appareil spécialisé pour détecter le signal. BOUKHARI MARWA

16 Recherche et dosage d'anticorps pour le diagnostic de maladies infectieuses : en Parasitologie et en virologie (virus de l'hépatite B, virus du SIDA…) L’ELISA a été largement utilisé dans divers domaines sache en immunologie, la pharmacie, biologique, etc. Egalement été trouvées dans le test de grossesse à domicile, et dans l'industrie alimentaire lors de la détection des allergènes alimentaires potentiels tels que le lait, etc. BOUKHARI MARWA

17 on a conclue que Le test ELISA peut être utilisé pour: effectuer une analyse qualitative : la présence ou l'absence de la protéine recherchée. Les analyses quantitatives : le dosages de l'intensité de la coloration est à l'aide de spectrophotomètres et fournit des informations sur la quantité de protéines dans l'échantillon. BOUKHARI MARWA

18 Merci!!!