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Basic Erol Baud Olivia Wavre Florence
Puces à ADN Basic Erol Baud Olivia Wavre Florence
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Plan de la présentation
Introduction Historique Rappel sur l’ADN Principe général d’une puce Puces à ADN Microarray spottée Puce Affymetrix® Applications Conclusion
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Historique 1953 Découverte de la structure de l’ADN
par Watson et Crick Le principe de fonctionnement d’une puce brevetée par Edwin Southern Développement des puces ADN par Davis & Brown Affymetrix commercialise une puce ADN
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Rappel sur l’ADN Génome humain : ~ gênes
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Principe général d’une puce
Extraction ↓ Transcription Amplification Marquage Sonde + cible Hybridation Lavage Résultat
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Puces à ADN Membrane en nylon Taille des spots : 0.5-1mm
Densité : quelques centaines de spots/cm2 Lame de verre à revêtement chimique Taille des spots : ~100μm Densité : spots/cm2 Lame de verre à revêtement chimique Taille des spots : ~20μm Densité : jusqu’à spots/cm2
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Microarray spottée Taille des spots : ~100μm
Densité : spots/cm2 Sondes : ADNc ou long oligonucléotides (30-70 bases) Cibles : ADNc avec marquage fluorescent (Cy3 et Cy5)
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Microarray spottée - Fabrication
Greffage des sondes pré-synthétisées directement sur le support Adressage électrochimique
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Microarray spottée - Hybridation
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Puce Affymetrix® Taille des spots : ~20μm Densité : 250000 spots/cm2
Sondes : Oligonucléotides courts (20-25 bases) Cibles : ARNc avec marquage fluorescent (biotine)
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Puce Affymetrix® - Fabrication
Synthèse des sondes in situ Par photolitographie
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Puce Affymetrix® - Hybridation
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Applications
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Conclusion Révolution technologique Rapidité et efficacité
Amélioration? Problèmes d’éthique?
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Références Les puces à ADN en hématologie, John De Vos, unité de thérapie cellulaire, CHU Montpellier 1-2_Avancees-Biologie-moleculaire Remerciements à Alexandre Kuhn du Laboratoire de neurogénomique fonctionnelle
