Groupage HLA et Cross Match

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1 Groupage HLA et Cross Match
G. Perrat Laboratoire HLA Lyon

2 Rappels HLA Molécules de classe I : A, B, Cw
Présentation de l’Ag aux lymphocytes T CD8+ Molécules de classe II : DR, DQ, DP Présentation de l’Ag aux lymphocytes T CD4+

3 Nomenclature HLA Sérologie vs Biologie moléculaire
A2  A*02 B7  B*07 DR4  DRB1*04 DQ2  DQB1*02 C et DP toujours en biologie moléculaire Sous types (Ag splits) A9  A23 / A24 B12  B44 / B45 B17  B57 / B58 B22  B54 / B55 / B56 DR2  DR15 / DR16 DQ3  DQ7 / DQ8 / DQ9 ….

4 Identité en greffe d’organes
A1 A2 B7 B8 DR4 DR11 DQ8 DQ7 RECEVEUR Ac anti A23 A24 A25 A32 DR15 DR16 DONNEUR 1 A1 A3 B51 B13 DR4 DR13 DQ8 DQ6 3 identités greffe autorisée DONNEUR 2 A1 A23 B7 B35 DR4 DR15 DQ8 DQ1 4 identités mais greffe interdite DONNEUR 3 A11 A31 B15 B27 DR1 DR11 DQ5 DQ7 2 identités greffe autorisée

5 Typage HLA Biologie Moléculaire Sérologie
Technique de PCR-SSP Prélever 1 tube EDTA Transfert Gerland / Pav P Arrivée Gerland avant 16h30 Délai de rendu = 4h30 Limite = qualité de ADN Typage A, B, C, DR, DQ, DP Sérologie Technique de LCT Prélever des ganglions ou 3 tubes ACD Transfert au pavillon P Transport à température ambiante Délai de rendu = 4h30 Limite = viabilité des cellules Typage A, B, DR, DQ Prévenir impérativement de l’heure d’arrivée des échantillons

6 Organisation 2011 Jours ouvrables avant 16H30 (heure limite d’arrivée du tube) Appel labo Gerland ( ) Tube EDTA impérativement envoyé à Gerland Accompagné d’un bon demande examens Nuits et week ends Appel technicien d’astreinte ( ) Tube EDTA envoyés au pavillon P

7 Lymphocytotoxicité + Lymphocyte (Ag1) AC anti-Ag1 AC anti-Ag2 C ’
Complexes Ag1-AC lysé Pas de complexes : Ag1, AC et C ’ restent séparés indemne

8 Organisation de la LCT Facteur important = Qualité des cellules
Arrivée des échantillons Séparation des cellules Durée 4H30 Dépôt des cellules dans les plaques contenant les antisérums Incubation Ajout du complément Incubation Ajout du colorant et lecture TRAVAIL DANS UN SEUL LABO PAS DE CONDITIONS PARTICULIERES MATERIEL = MICROSCOPE, CENTRIFUGEUSE

9 PCR-SSP (amorces spécifiques de polymorphismes)
AMPLIFICATION Amorces complémentaires Amorces non complémentaires amplification Pas d ’amplification CONTRÔLE (gel agarose 2%) POSITIF NEGATIF

10 Organisation de la PCR-SSP
Arrivée des échantillons Extraction ADN Durée 4H30 Préparation de la réaction de PCR Amplification de l’ADN Contrôle de la migration sur gel Analyse sur table à UV Interprétation informatisée 2 ZONES DISTINCTES ET PHYSIQUEMENT SEPAREES CAR RISQUE DE CONTAMINATION MATERIEL = HOTTE, THERMOCYCLEUR, TABLE UV, GENERATEUR, INFOMATIQUE

11 Cross Match Sérologie (LCT) Cytométrie de flux Transfert rapide
Délai de rendu 3h si rec non immunisé 5h si rec immunisé Test au DTT systématique = éliminer les IgM Examen pré greffe Sérum du jour doit être négatif XM positif sur lymphocytes T = greffe interdite Cytométrie de flux Examen réalisé après la greffe pour les receveurs immunisés et avant la greffe pour les donneurs vivants Si positif : adaptation du traitement immunosuppresseur pour les receveurs greffés Recherche de cause Refus du donneur pour les greffes avec donneur vivant Cellules issues du ganglion ou de rate (lymphocytes T et B) + sérum(s) du receveur Conservation de matériel biologique : ADN et cellules du donneur et du receveur