Proteomique et developpement de biomarqueuRs de viabilité parasitaire

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1 Proteomique et developpement de biomarqueuRs de viabilité parasitaire
Valot B, Rognon B, Prenel A, Baraquin A, Knapp J, Anelli M, Richou C, Bresson-Hadni S, Grenouillet F, Wang J, Vuitton DA, Gottstein B, Millon L. Searching for antigenic Echinococcus multilocularis vesicular fluid proteins to be used as potential biomarkers to monitor the course of alveolar echinococcosis. Proteomics Clinical Applications, en revision

2 Suivi thérapeutique Evaluation de la viabilité parasitaire (suivi de l’efficacité de l’ABZ) Sérologie / cinétique des anticorps dirigés contre antigènes Em2+/Em18 ou Em18 TEP / TDM (FDG) : activité périlésionelle – (temps tardif) Non optimal probablement beaucoup de patients traités par excès (ABZ : toxicité hépatique, tératogène, couteux)

3 Objectif / Stratégie Développer des nouveaux biomarqueurs permettant d’évaluer la viabilité parasitaire → Anticorps sériques dirigés contre des protéines produites par le parasite sous sa forme viable = bons candidats

4 Objectif / Stratégie Développer des nouveaux biomarqueurs permettant d’évaluer la viabilité parasitaire → Anticorps sériques dirigés contre des protéines produites par le parasite sous sa forme viable = bons candidats Approche immuno proteomique Identification de protéines produites dans le fluide vésiculaire d’E. multilocularis (FV), capable d’induire la production d’anticorps chez des patients non répondeurs à l’ABZ 2 approches comparatives

5 Culture In vitro E mulitlocularis Extraction des proteines du FV
2D- SDS PAGE Western Blot R-ABZ NR-ABZ LC-MS/MS 4 serums de patients EA, non  répondeurs ABZ (ABZ-NR) 5 serums de patients EA, répondeurs ABZ (ABZ-R) 2 serums de patients EA, « cured » 5 serums contrôles (témoins sains sans EA)

6 Culture In vitro E mulitlocularis Extraction des proteines du FV
2D- SDS PAGE Immunoprecipitation Western Blot R-ABZ NR-ABZ shot gun /MS LC-MS/MS 4 serums de patients EA, non  répondeurs ABZ (ABZ-NR) 5 serums de patients EA, répondeurs ABZ (ABZ-R) 2 serums de patients EA, « cured » 5 serums contrôles (témoins sains sans EA)

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9 Production of recombinant proteins
Conclusion Identification de 9 protéines du FV capables d’induire la production d’anticorps chez les patients NR-ABZ → production sous forme d’antigènes recombinants en cours pour le développement d’un test ELISA Protein identification DNA sequence Production of recombinant proteins ELISA test E.coli expression system

10 Perspectives → Aide à la décision d’arrêt du traitement par ABZ ?
Evaluation de ce nouveau test ELISA pour la mesure de la viabilité parasitaire chez des patients traités par ABZ biobanque du CNR Echinococcose → Aide à la décision d’arrêt du traitement par ABZ ?