BIENVENUE A L’EXPOSE DE MASTER EN BIOCHIMIE CLINIQUE RÉPUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON Peace – Work - Fatherland UNIVERSITÉ DE DSCHANG UNIVERSITY.

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1 BIENVENUE A L’EXPOSE DE MASTER EN BIOCHIMIE CLINIQUE RÉPUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON Peace – Work - Fatherland UNIVERSITÉ DE DSCHANG UNIVERSITY OF DSCHANG Scholae Thesaurus DschangensisIbiCordum BP 96, Dschang (Cameroun) – Tél./Fax (237) 233 45 13 81 Website:http://www.univ- dschang.org. Email : udsrectorat@univ- dschang.org FACULTE DES SCIENCES FACULTY OF SCIENCE Département de Biochimie Department of Biochemistry BP 67, Dschang (Cameroun) Tél./Fax (237) 243 691 506 E-mail : faculte.sciences@univ- dschang.org

2 Présenté par: TANE TSAMENE CHRISTIAN ATCHABASSI NDJONZO MICHELE MARLENE NGIMGOH NGEMESHE STANLEY GANNO TIOMO JACOBINE YNGRID TAGOMO SOB SANDRA NOUBIEGANG FRANCK AROL THEME 7: puce a anticorps

3  INTRODUCTION  I) DÉFINITION DES TERMES CLÉS ET DU PRINCIPE DES PUCES A ANTICORPS  1) Définition des termes clés  2) Principe des puces à anticorps  II) LES AVANCEES DES PUCES A ANTICORPS  III) CONCEPTION EXPÉRIMENTALE DES PUCES A ANTICORPS  1) Equipements et réactifs  5) détection  IV) CARACTÉRISTIQUES DES PUCES A ANTICORPS  V) APPLICABILITÉ DES PUCES A ANTICORPS  1) Recherche de base  2) Recherche clinique  VI) PERSPECTIVE FUTURE DES PUCES A ANTICORPS  CONCLUSION  INTRODUCTION  I) DÉFINITION DES TERMES CLÉS ET DU PRINCIPE DES PUCES A ANTICORPS  1) Définition des termes clés  2) Principe des puces à anticorps  II) LES AVANCEES DES PUCES A ANTICORPS  III) CONCEPTION EXPÉRIMENTALE DES PUCES A ANTICORPS  1) Equipements et réactifs  5) détection  IV) CARACTÉRISTIQUES DES PUCES A ANTICORPS  V) APPLICABILITÉ DES PUCES A ANTICORPS  1) Recherche de base  2) Recherche clinique  VI) PERSPECTIVE FUTURE DES PUCES A ANTICORPS  CONCLUSION

4  détecter et manipuler des molécules biologiques  l’utilisation multiplexée d’anticorps dans des puces  identifiées et être mesuré en parallèle, parfois dans un très petit échantillon les volumes.  Une puce à anticorps est une plate-forme ELISA à haut débit pour l'expression efficace des protéines  Profilage, dépistage et comparaison entre échantillons normaux, malades ou traités  détecter et d'analyser des centaines de protéines natives simultanément, économiser des ressources précieuses et réduire le nombre de variables qui affectent les résultats expérimentaux

5 Anticorp puce Puce associe a des substances non proteique Puce a anticorps

6 Les immunoglobulines présentent une grande diversité expliquée par :  la variabilité isotypique, qui est liée aux différents types de chaînes légères et lourdes pour tous les individus d’une même espèce  la variabilité allotypique, qui est observée entre individus d’une même espèce  la variabilité idiotypique, qui est observée entre les anticorps provenant de plasmocytes différents chez un individu

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9  Les puces à anticorps sont utilisées pour: -L’évaluation de l’abondance des protéines cible dans le sérum (cancer du sein) -Le profil de l’expression des protéines dans les biopsies (cancer du foie) -La phosphorylation des protéines dans les cellules traitées par les agents anticancéreux  Les puces à anticorps sont utilisées pour: -L’évaluation de l’abondance des protéines cible dans le sérum (cancer du sein) -Le profil de l’expression des protéines dans les biopsies (cancer du foie) -La phosphorylation des protéines dans les cellules traitées par les agents anticancéreux

10 -La recherche des bios marqueurs (cancer du sein) -La trans-activation des récepteurs tyrosines kinases dans les cellules cancéreuses En général l’étude des protéines pouvant être impliquer dans le diagnostic de certaine pathologie -La recherche des bios marqueurs (cancer du sein) -La trans-activation des récepteurs tyrosines kinases dans les cellules cancéreuses En général l’étude des protéines pouvant être impliquer dans le diagnostic de certaine pathologie

11 Le protocole de fabrication de la puce à anticorps repose sur trois phases principales : 1) La fonctionnalisation du support, basée sur une publication récente concernant une technique de greffage de saccharides sur des lames de verre. Cette technique repose sur l’élaboration d’un "bras espaceur", à même le support, sur lequel seront greffés les anticorps et dont le rôle est d’orienter ces greffages et de réduire les effets d’encombrement stérique Le protocole de fabrication de la puce à anticorps repose sur trois phases principales : 1) La fonctionnalisation du support, basée sur une publication récente concernant une technique de greffage de saccharides sur des lames de verre. Cette technique repose sur l’élaboration d’un "bras espaceur", à même le support, sur lequel seront greffés les anticorps et dont le rôle est d’orienter ces greffages et de réduire les effets d’encombrement stérique

12 2) La fabrication par stéréolithographie de la structuration du support fonctionnalisé devant permettre la localisation des greffages des anticorps 3) Le greffage orienté des anticorps, après oxydation de ceux-ci en vue de créer une liaison covalente stable avec le bras espaceur Suivant une méthodologie particulière 2) La fabrication par stéréolithographie de la structuration du support fonctionnalisé devant permettre la localisation des greffages des anticorps 3) Le greffage orienté des anticorps, après oxydation de ceux-ci en vue de créer une liaison covalente stable avec le bras espaceur Suivant une méthodologie particulière

13  l’utilisation Les faibles volumes d’échantillons  La reproductibilité et le débit peuvent être plus élevés  identités des protéines mesurées sont connues ou peuvent être facilement caractérisées  le criblage efficace de nombreux candidats marqueurs pour révéler les associations entre les protéines et les états pathologiques ou expérimentaux  l’utilisation Les faibles volumes d’échantillons  La reproductibilité et le débit peuvent être plus élevés  identités des protéines mesurées sont connues ou peuvent être facilement caractérisées  le criblage efficace de nombreux candidats marqueurs pour révéler les associations entre les protéines et les états pathologiques ou expérimentaux

14  peut produire moins de résultats faussement positifs et faussement négatifs par rapport aux tests basés sur des protéines simples  La Co-incubation de deux échantillons différents  les analytes dans le test et les solutions de référence se font concurrence pour la liaison au niveau des anticorps  peut produire moins de résultats faussement positifs et faussement négatifs par rapport aux tests basés sur des protéines simples  La Co-incubation de deux échantillons différents  les analytes dans le test et les solutions de référence se font concurrence pour la liaison au niveau des anticorps

15 -- Recherche de base(Voie de signalisation liée, Mécanisme des médicaments) -- Recherche clinique( Maladies auto-immunes, Maladies infectieuses, Cancer) Mais Ces systèmes sont néanmoins limités par la disponibilité des anticorps à haute affinité pour la totalité des protéines étudiées, et sont donc supplantés par d’autre techniques (puce à tissus "tissue array" et Western Blot)

16  la validation consiste à confirmer et à certifier la spécificité et la reproductibilité du test sur plusieurs lots d’expériences, ainsi qu’à décrire les sources d'interférence et de variance  la traduction et la diffusion Rendre les données et les tests de la matrice d'anticorps plus disponibles lui permettra par la suite d’aller au-delà des laboratoires qui développent des technologies pour rencontrer un groupe d'utilisateurs encore plus grand

17  La sensibilité analytique et les degrés de multiplexage

18  les puces à anticorps sont des techniques d’étude très sophistiquer, facile à mettre sur pied et d’une grande importance dans le domaine de la clinique et aussi ces puces ont progressivement évolué en tant qu'outils d'analyse pour la recherche protéonomique  Les puces à anticorps et les concepts basés sur ces données tiennent les promesses de contribuer à l'avancement de la recherche et même des applications de diagnostic

19  MERCI DE VOTRE AIMABLE ATTENTION