L’Étude des Microorganismes

Présentation au sujet: "L’Étude des Microorganismes"— Transcription de la présentation:

1 L’Étude des Microorganismes
Microbiologie L’Étude des Microorganismes

2 Définition d’un Microorganisme
Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires

3 Cellule de plante et animale
Micro_? Microscope optique Microscope électronique L’œil humain 0.1nm nm nm nm 1 µm µm 100 µm 1 mm 1 cm m Atome Acide aminé Protéine Virus Chloroplaste Bactérie Cellule de plante et animale Fourmis Rotifère

4 _Organisme? Qui est vivant Qui peut vivre de façon indépendante
Possède un métabolisme Qui peut vivre de façon indépendante N’est pas l’unité d’une organisation multicellulaire Parasite obligatoire?

5 Eubactéries Pathogènes qui peuvent causer une maladie
Bactéries du sol, eau, air, tube digestif, etc. Peuvent utiliser l’oxygène ou pas Composés organiques et inorganiques utilisés comme source de carbone Composés organiques ou inorganiques utilisés comme source d’énergie Certaines peuvent se différentier ex. Bacillus et Clostridium - Sporogénèse

6 Travailler en Microbiologie
La Technique Stérile

7 1re Étape Se laver les mains aussitôt que vous entrez dans le laboratoire Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle

8 2e Étape Faire la désinfection de votre espace de travail
Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement

9 Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile Milieu de culture Éprouvettes Assiettes de Pétris Boucle d’ensemencement Etc.

10 3e Étape Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes Préviens la contamination de vos cultures Préviens la contamination de votre environnement Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

11 Transferts par la Technique Stérile
Stériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle d’ensemencement

12 Transferts par la Technique Stérile
Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle d’inoculation Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

13 Transferts par la Technique Stérile
Chauffer l’ouverture du tube au bruleur Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Garder l’ouverture du capuchon vers le bas Réchauffement de l’ouverture

14 Transferts par la Technique Stérile
Utiliser la boucle stérile pour retirer l’inoculum Liquide de bouillons Solide de géloses Solide de pentes Retirer l’inoculum

15 Transferts par la Technique Stérile
Chauffer l’ouverture du tube au bruleur encore une fois! Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Réchauffement de l’ouverture

16 Transferts par la Technique Stérile
Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

17 Transferts par la Technique Stérile
Inoculation Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube Retirer capuchon Chauffer l’ouverture Inoculer Fermer le tube

18 Inoculation d’une Gélose
Garder la boucle à l’extrémité du fil d’ensemencement parallèle avec la surface de la gélose Faire des stries de gauche à droite à 12:00

19 Transferts par la Technique Stérile
Restériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Déposer sur la table si vous avez fini! Boucle d’ensemencement

20 Stries pour Colonies Simples

21 Microorganismes en Laboratoire
Les Milieux de Croissance

22 Buts Croissance sous des conditions contrôlées Maintien
Isolation de cultures pures Tests métaboliques

23 Types Liquides (bouillons) Permets la culture en suspension
Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres Permets la croissance de grands volumes

24 La Croissance en Bouillon
Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Turbide Limpide + sédiment

25 Milieux Solides Agents de solidifications La gélatine L’agar Protéine
Source animale Solide à des températures < 28oC L’agar Polysaccharide dérivé d’une algue Demeure solide à >37oC Fond à 100oC

26 Croissance sur Géloses d’Agar
Croissance sur surface solide Croissance isolée Permets l’isolation de colonies simples Permets l’isolation de cultures pures Colonie simple

27 Les colonies sont originaires de cellules uniques de différentes bactéries puisqu’une colonie étalée de façon répétée génère des colonies identiques

28 Milieux Solides (suite)
Croissance sur pente Croissance en surface et en profondeur Différentes disponibilités d’oxygène Entreposage à long terme

29 Milieux Solides (suite)
Tube profond Milieu semi-solide Entreposage à long terme Faible disponibilité d’oxygène

30 La Microscopie Les Colorations

31 Les Colorants Cationique : Chargés positivement Coloration Positives
Interagissent avec les groupements négatifs des membranes plasmiques Ex. Bleu de méthylène, cristal violet, safranine, vert de malachite Coloration Positives Anionique : Chargés négativement Interagissent avec le substrat de fond Noir de nigrosin, encre d’Inde Coloration Négatives

32 Colorations Positives
B A Coloration du spécimen Coloration indépendante de l’espèce

33 Colorations Négatives
Coloration de l’environnement de fond Coloration indépendante de l’espèce Grand bacille Petit bacille

34 Méthodes Coloration simple: Un seul agent de coloration
Colorant cationique ou anionique Permet de déterminer la taille, la forme, et l’arrangement des cellules

35 Les Formes Cellulaires
Coccus: Sphères Division sur 1,2 ou 3 plans Nombre de plans de division donne différents arrangements Arrangements typiques de différents genres bactériens

36 Les Cocci (Coccus) Plans de division Arrangements Diplococcus
Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus

37 Les Formes Cellulaires (suite)
Bacilles: Bâtonnets Division sur 1 plan seulement Arrangements typiques de différents genres bactériens

38 Les Bacilles Plans de division Arrangements Diplobacille
Streptobacille

39 Compter les Microorganismes

40 Méthodes Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

41 Comptes Viables Dilutions en séries de l’échantillon
Étalement des dilutions sur milieu approprié Chaque colonie simple est originaire d’une unité formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans l’échantillon

42 Dilutions pour Comptes Viables

43 63 UFC/0. 1mL de 10-5 630UFC/1. 0mL de 10-5 630UFC/ml X 105 = 6
63 UFC/0.1mL de UFC/1.0mL de UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans l’échantillon original

44 = Avantages: Limites: Dénombre les microorganismes viables
Peu distinguer différents microorganismes Limites: Pas de milieu universel Nécessite la croissance du microorganisme UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus  un de E.coli = ?