Bi 231: Ingénierie des Protéines

Présentation au sujet: "Bi 231: Ingénierie des Protéines"— Transcription de la présentation:

1 Bi 231: Ingénierie des Protéines
cours 4

2 Plan Général I. Introduction et rappels.
II. Purification des protéines. III. Surexpression d'une protéine. IV. Mutagenèse: techniques et applications. V. L'insuline : exemple d'une stratégie. VI. Analyse d'articles.

3 IV. Mutagenèse: techniques et applications.
Mutagenèse aléatoire. Alanine scanning. Mutagenèse dirigée

4 41 Mutagenèse aléatoire. Objectifs :
modification du phénotype, recherche de la mutation associée Moyens : irradiations (UV, RX), produits chimiques utilisation de DNApol modifiée

5 Agents mutagènes Irradiations  modification d'une ou plusieurs bases
produits chimiques : DNApol modifiée, suppression de la fonction exonucléasique  pas de correction possible (exple fragment kleenow, MutaGen™ )

6 42 Alanine scanning. Objectifs :
 recherche du (des) résidu(s) responsable(s) de la fonction d'une protéine. Moyens : amplification par PCR du gène de la protéine d'intérêt avec oligonucléotides adaptés.

7 Principe de la PCR.

8 T V V L R P S R G L Y H H P A G L R H H
Séquence nucléique actgtggttcttcggccatcccgaggtctatatcatcatcctgccgggcttcggcatcatca cttcggccatcccgaggtgcttatcatcatcctgccgg Séquence protéique T V V L R P S R G L Y H H P A G L R H H R P S R G A Y H H P A G L R H H

9 43 mutagenèse dirigée Objectifs :
 Modification ciblée d'un résidu pour étudier sa fonction dans une protéine. Moyens : amplification par PCR du gène de la protéine d'intérêt avec oligonucléotides adaptés.

10 T V V L R P S R G L Y H H P A G L R H H - - - - -L R P S R D L Y H H P
Séquence nucléique actgtggttcttcggccatcccgaggtctatatcatcatcctgccgggcttcggcatcatca cttcggccatcccgagacctatatcatcatcctgc Séquence protéique T V V L R P S R G L Y H H P A G L R H H L R P S R D L Y H H P