DDP Double Digest Problem présenté par Patrick Charbonneau Cours: IFT 6100 Université de Montréal.

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1 DDP Double Digest Problem présenté par Patrick Charbonneau Cours: IFT 6100 Université de Montréal

2 Au menu Définition des enzymes. Définition, origine et utilisation des endonucléases. Définition et utilisation des cartes de restriction. Théorie des Cassettes.

3 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

4 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

5 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

6 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

7 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

8 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

9 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

10 Les enzymes - Molécules de nature protéique. - Agissent comme catalyseur en augmentant la vitesse de réaction. - Possèdent une grande spécificité pour le substrat sur lequel elles agissent.

11 Origine des enzymes La vie a eu plusieurs millions d’années pour créer ces enzymes. C’est surtout au niveau des bactéries que ces enzymes ont été créées et testées. Les enzymes actuelles sont optimales et ne laissent aucune place à l’amélioration.

12 Les nucléases Ce sont des enzymes spécialisées dans la dégradation des acides nucléiques et ce sont ces enzymes qui ont permit à la science d’effectuer des découpages non aléatoire de génome in vitro. Il existe deux grandes catégories de nucléases caractérisées selon leur mode d'action. les exonucléases qui dégradent par excision du nucléotide situé en extrémité de chaîne. Habituellement, a partir du coté 3’. Et les endonucléases qui coupent des liaisons phosphodiester à l’intérieur même de la chaîne d’ADN.

13 Les endonucléases Parmi ces endonucléases, certaines sont non spécifiques et hydrolysent des liaisons phosphodiester au hasard, tandis que d'autres hydrolysent des liaisons phosphodiester uniquement à l’intérieur de site spécifique reconnue par l’enzyme.Autrement dit, cette dernière est communément appelée endonucléase de restriction.

14 Les endonucléases Parmi ces endonucléases, certaines sont non spécifiques et hydrolysent des liaisons phosphodiester au hasard, tandis que d'autres hydrolysent des liaisons phosphodiester uniquement à l’intérieur de site spécifique reconnue par l’enzyme.Autrement dit, cette dernière est communément appelée endonucléase de restriction.

15 Les endonucléases Parmi ces endonucléases, certaines sont non spécifiques et hydrolysent des liaisons phosphodiester au hasard, tandis que d'autres hydrolysent des liaisons phosphodiester uniquement à l’intérieur de site spécifique reconnue par l’enzyme.Autrement dit, cette dernière est communément appelée endonucléase de restriction.

16 Les endonucléases Parmi ces endonucléases, certaines sont non spécifiques et hydrolysent des liaisons phosphodiester au hasard, tandis que d'autres hydrolysent des liaisons phosphodiester uniquement à l’intérieur de site spécifique reconnue par l’enzyme.Autrement dit, cette dernière est communément appelée endonucléase de restriction.

17 Les endonucléases On remarque ici que les extrémités sont décalées et débordantes du cotés 5’. Ces extrémités sont appelées extrémités cohésives car, en raison de la structure palindromique des séquences de reconnaissance, elles ont tendance à s'hybrider en solution, surtout en présence de ligase. Utile pour la recombinaison in vitro et pour la construction de molécules chimères.

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25 Cartes de restriction (cartes physiques) En utilisant les propriétés des enzymes de restriction, qui reconnaissent des points précis du génome au nucléotide près, l'identification des sites de coupure permet d'établir une carte extrêmement détaillée appelée carte de restriction.

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39 MERCI!!!